【摘 要】
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目的:探讨靶向细胞周期蛋白依赖激酶CDK2(cyclin-dependent-kinase2)及细胞周期蛋白E(CyclinE)的小分子干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞株HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。 方法:
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目的:探讨靶向细胞周期蛋白依赖激酶CDK2(cyclin-dependent-kinase2)及细胞周期蛋白E(CyclinE)的小分子干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞株HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。
方法:根据GenBank中登录的人和鼠CDK2、CyclinE序列,应用siRNA设计软件,设计并构建CDK2、CyclinE干扰RNA真核表达载体;脂质体法转染肝癌细胞株HepG2细胞,流式细胞仪分析CDK2及CyclinE对HepG2细胞增殖的影响;Western blot法检测CDK2、CyclinE活性的变化对Caspase-3活性的影响。
结果:
1.成功构建CDK2及CyclinE干扰RNA真核表达载体psiCDK2、psiCyclinE,用脂质体法导入肝癌细胞株HepG2细胞中,有效表达。
2.转染48h后与空载体组相比:psiCDK2、psiCyclinE组G1期细胞增多,G2/M和S期细胞减少;Western blot分析表明psiCDK2、psiCyclinE组Caspase-3酶原被激活。
结论:
1.成功构建CDK2及CyclinE干扰RNA真核表达载体psiC-DK2、psiCyclinE。
2.靶向CDK2、CyclinE的siRNA能抑制HepG2细胞的增殖。
3.靶向CDK2、CyclinE的siRNA能激活Caspase-3,诱导肝癌细胞HepG2凋亡。
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