背景: KCNA5基因（Potassium voltage-gated channel, shaker-related subfamily, member 5）编码的KCNA5通道（Kv1.5钾通道）介导了心房的超速激活延迟整流钾电流（ultrarapidly activating delayed rectifier potassium current, Ikur）。Ikur仅存在于心房肌,不存在于心室肌。由于房颤（atrial fibrillation , AF）的发生发展与心房Ikur的异常存在密切关系,因此目前认为KCNA5通道蛋白是治疗AF的一个理想靶点。FHL2由4个半LIM结构域组成,属于LIM-only蛋白家族,在FHL家族中有较为深入的研究。已知FHL2通过与转录因子、信号转导物和转录辅助因子等相互作用参与多种信号转录过程,且参与多种疾病的发生发展过程。最新研究表明FHL家族另一成员FHL1（与FHL2有47.9%的氨基酸相同）,与KCNA5通道蛋白相互作用并调控其表达及功能。FHL1主要在骨骼肌中表达,而FHL2则主要在心肌细胞中表达,因此阐明FHL2是否与KCNA5相互作用更加有助于深刻理解心脏KCNA5通道的调控,为开发更为理想的治疗房颤药物提供了研究思路。目的:运用免疫共沉淀和免疫荧光技术初步验证FHL2蛋白与KCNA5蛋白间的相互作用,为进一步研究对KCNA5蛋白功能表达的调节奠定基础。方法:（1）质粒构建:以编码KCNA5的全长cDNA为模板,通过PCR方法在其开放读框的两端分别加上HindⅢ（5’端）和EcoRⅠ（3’端）两个酶切位点,去除末端的终止密码;应用HindⅢ和EcoRⅠ分别酶切pcDNA3.1/myc-His C质粒和PCR产物,应用DNA连接酶将线性的pcDNA3.1/myc-His C和PCR产物进行连接,得到pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5质粒。pcDNA3.0-FHL2由导师提供（已经测序鉴定）（。2）细胞培养和基因转染:培养HEK293细胞,应用Lipofectamine 2000将pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5质粒和pcDNA3.0-FHL2质粒共转染HEK293细胞。（3）免疫共沉淀:将抗FHL2特异性抗体和总蛋白进行混合,再加入Protein A/G Plus-Agarose进行混合,离心沉淀,将沉淀物进行电泳,随后应用抗Myc抗体进行Western Blot分析。（4）免疫荧光细胞化学分析:将质粒pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2共转染HEK293细胞,转染48小时后固定,应用抗FHL2一抗（羊来源）和Alexa 488标记的驴抗羊二抗检测FHL2蛋白,应用抗Myc一抗（兔来源）和Alexa 555标记的驴抗兔二抗检测KCNA5-Myc融合蛋白。结果:（1）成功构建pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5质粒,并经测序证明KCNA5编码的蛋白与载体的myc-His在同一读框,碱基无突变。（2）pcDNA3.1/myc-His C-KCNA5和pcDNA3.0-FHL2质粒共转染HEK293细胞,提取细胞蛋白进行免疫共沉淀实验和Western Blot,实验组和阳性对照组均可见一条约75KD大小的条带,与KCNA5-myc-His融合蛋白大小相当,阴性对照组未见条带。（3）质粒共转染HEK293细胞,进行免疫荧光实验后,用倒置荧光显微镜观察可见在细胞膜上KCNA5蛋白和FHL2蛋白分别发出红色荧光和绿色荧光,二者荧光重叠部分（黄色荧光）提示这两种蛋白在细胞上共定位。结论:本试验通过免疫共沉淀和免疫荧光细胞化学分析,发现FHL2蛋白与KCNA5蛋白存在相互作用。这一发现非常有助于理解KCNA5钾通道（Kv1.5钾通道）的调控机理,同时也有助于更加深刻理解房颤的发病机理。