乌骨藤提取物C21甾体对人胃癌BGC-823裸鼠移植瘤的作用机制研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xjdszcjl
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目的:  探讨天然植物乌骨藤的主要活性成分—乌骨藤提取物C21甾体对人胃癌细胞株BGC-823裸鼠皮下移植瘤的抗肿瘤作用及其机制,为研制低毒、耐药、高效的抗胃癌药物,提供理论依据、指导方法以及实验材料。  方法:  建立人胃癌细胞株BGC-823裸鼠皮下移植瘤模型进行体内动物实验,釆用随机数字法随机(相同窝别、相同性别、相同周龄、体重18-22g)分为:  A:阴性对照组(无菌生理盐水);  B:乌骨藤C21甾体低剂量治疗组(5 mg/kg);  C:乌骨藤C21甾体高剂量治疗组(15 mg/kg);  D:5-Fu治疗组(20mg/kg);每组各8只,每日1次,每次0.4ml,采取瘤周皮下注射,共给药10天,每日称鼠体重量,测量肿瘤体积,末次给药后次日颈椎脱臼处死荷瘤鼠,完整分离瘤体,将肿瘤组织用于后续实验。  包括:  ①称量瘤重及测量体积,计算乌骨藤提取物C21甾体的抑瘤率;  ②HE染色光镜形态学观察;  ③免疫组化方法检测VEGF、YAP、Bcl-2、Bax的表达,并分析它们在抗肿瘤作用的信号通路上对相关蛋白调控靶点的作用;  ④Western Blot检测乌骨藤C21甾体诱导胃癌肿瘤组织Hippo-YAP和PTEN-AKT-mTOR信号通路的变化。  结果:  ①乌骨藤C21甾体对肿瘤组织具有明显的抑制作用,低剂量组、高剂量组的抑瘤率分别为14.24%和30.70%,与生理盐水组对比具有显著的差异( P<0.05),且各组浓度之间,随着药物浓度的增加,抑瘤率显著增高(P<0.05)。  ②光镜显示下,乌骨藤C21甾体组肿瘤细胞显现出不同程度的退行性变,核固缩、深染,单个细胞死亡及局灶性坏死。  ③相比阴性对照组(生理盐水),乌骨藤C21甾体治疗组分别作用10天后,Bax主要位于胞浆中,并且在胃癌中的表达水平,比对照组瘤组织中的表达显著上调,VEGF、Bcl-2主要位于胞浆中,并且在胃癌中的表达水平,比对照组瘤组织中的表达显著下调,而YAP的表达在治疗组中也显著下调。  ④移植瘤胃癌中PI3K-AKT-mTOR信号通路的AKT磷酸化水平较对照组降低。Hippo-YAP信号通路中,p-YAP与对照组相比,显著上调。  结论:  我们的体外移植瘤研究表明:乌骨藤C21甾体能够显著抑制肿瘤细胞增殖,具有较显著的抗肿瘤作用。其中乌骨藤C21甾体是乌骨藤的有效活性成分,其作用可能是通过上调Bax、p-YAP及下调Bcl-2、VEGF和p-AKT以及YAP基因的表达,为临床的决策和治疗提供理论依据。乌骨藤C21甾体在本次的体内实验中,疗效显著,可能成为临床胃癌化疗的重要药物之一。
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