大豆疫霉和棉花黄萎菌几个效应因子的分泌和转录激活活性的验证与靶标蛋白鉴定

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大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)是卵菌的重要模式种,引起的大豆疫霉根腐病是世界上广泛分布的毁灭性病害。研究大豆疫霉与植物的互作机制,对于防治植物卵菌病害意义重大。棉花黄萎病由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)引起,是棉花生产上危害最为严重的世界性病害之一,在世界各主要产棉区均有发生,极大地限制着棉花产量和质量的提高,也是困扰我国棉花生产的重大难题。卵菌和真菌植物病原物分泌的效应因子会被转运到植物细胞中在病害扩展和植物抗病反应中起作用。大豆疫霉菌的PsISO基因和大丽轮枝菌的VdISO基因都可以编码异分支酸水解酶蛋白。PsCRN108和PsCRN78是大豆疫霉的CRN家族效应因子。这四个蛋白是否分泌还尚不清楚,本文应用酵母分泌系统对PsISO, VdISO, PsCRN108和PsCRN78四个基因的分泌功能进行了检测,结果证明它们在酵母中具有分泌功能,说明它们在病原物侵染植物中也具有分泌能力,为进一步研究这几个效应蛋白在致病过程中发挥作用奠定了基础。转录因子是在基因表达过程中对基因的转录起激活或抑制的作用的反式作用因子。本实验室应用生物信息学的方法研究大豆疫霉的效应因子的功能,发现Avh138, Avh256, Avh454, Avh62,CRN108几个效应因子可能具有转录激活活性,实验通过酵母细胞测试几个的效应因子的转录激活活性,但在酵母中没有检测到几个基因的转录激活活性。本实验采用酵母双杂交技术,以大豆疫霉P6497菌株中的CRN115为诱饵蛋白,在大豆cDNA文库中进行寄主靶标的筛选,并验证了本实验室前期应用免疫共沉淀的方法筛选到的互作蛋白。结果表明PsCRN115可能与a-tublin、CAT1a互作。通过对PsCRN115.PsCRN63和烟草和大豆中的CAT三者的互作关系的研究,发现PsCRN115与PsCRN63不互作,PsCRN115与烟草中的CAT1a互作,PsCRN63与烟草中的CAT1a、 CATlb互作,这为研究相关效应因子的功能提供了线索。
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