目的:青蒿素是从植物青蒿中提取的抗疟疾药,具有高效、速效、低毒的特点,是我国唯一被世界卫生组织认可的按西药研究标准研究开发的植物药。我国是世界上青蒿素原料药最大的生产国,其产量占全球九成。目前国内外对青蒿的研究主要集中于青蒿素及其衍生物上,而对青蒿其他活性成分的研究及报道很少。据文献报道青蒿具有多种药理活性,本课题在保障青蒿素提取质量的基础上,结合传统医学的记载,对青蒿中其它成分进行探讨,以达到对青蒿资源最大限度的利用。本课题通过体外促凝血实验,初步筛选出青蒿止血活性部位,为青蒿作为止血药的临床应用提供客观的实验依据。同时,精油也是青蒿中除青蒿素之外的一大类物质,文献报道其具有显著的抗菌作用。基于以上两点,本课题组提出一种新剂型的设计:以筛选出的止血活性部位和青蒿精油作为主要的物质基础,使其在止血的同时兼具抗菌效果。本课题对青蒿资源的深度研究具有一定的的学术价值及潜在的应用前景。方法:1.青蒿体外凝血评价方法的筛选:①青蒿经75%乙醇浸提,得粗提物。粗提物经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇按顺序依次萃取,得各种有机溶剂萃取物。以凝血板法、试管法、血浆复钙时间测定法进行体外凝血实验的比较研究。②筛选出比较理想的评价方法,并用实验室可用止血中草药对此方法进行验证。2.青蒿止血活性部位的确定:①青蒿粗提物及四部分萃取物通过凝血板法,试管法及血浆复钙时间进行测定。对青蒿正丁醇部分通过聚酰胺,MCI,凝胶柱等进行分离纯化。②以血浆复钙时间作为检测标准,对正丁醇萃取部分过聚酰胺柱后水洗脱部分再上MCI柱,经20%甲醇洗脱部分(记为α)进行多次重复体外凝血实验比较研究。③有效部位的成分分析:采用化学定性鉴别法,主要对鞣质类、黄酮类、生物碱、有机酸、氨基酸、挥发油、蛋白质、糖类、蒽醌类、皂甙类等几大类物质进行初步鉴定。3.拟开发的新型抗菌止血剂型研究:首先,将α部分与精油按一定比例混合测定其抗菌与止血活性;其次,通过对新型的抗菌止血剂型进行设计,得出比较合理的作用模型。结果:1.中草药凝血评价模型的筛选:通过对青蒿乙醇粗提物以及四部分有机溶剂萃取物(石油醚部分,乙酸乙酯部分,正丁醇部分,水部分)进行三种体外凝血实验方法的比较研究,得出青蒿粗提物具有体外凝血效果,且其正丁醇部分凝血时间缩短率最高。血浆复钙时间同凝血时间测定法相比较,具有对凝血时间敏感,血浆凝固较快的特点,实验在一定的温度下进行,是连续地而非间歇地进行观察的,实验终点比较清楚,结果可复制。2.青蒿止血活性部位的确定:①多次重复体外凝血实验的比较研究,均证明青蒿正丁醇萃取部分及α部分具有良好的体外促凝作用。②活性部位筛选过程中,凝血时间缩短率依次为:青蒿粗(8.51%),青蒿正丁醇部分(14.89%),正丁醇部分过聚酰胺柱经水洗脱部分(记为青正水:22.11%),α部分(27.37%),Sc,Sd及剩余部分凝血时间缩短率明显低于青蒿粗提物甚至出现不凝现象。α部分的凝血时间缩短率明显大于萃取前的青蒿粗体物,同时也大于其后的提取部分。因此,可说明α部分为青蒿止血的有效部位。③定性鉴别结果表明:初步确定有效部位的主要成分为鞣质类,生物碱,有机酸,糖,蒽醌等几大类。3.新型抗菌止血贴剂研究:①将α部分与精油按1:1混合,测定其抗菌与止血活性。结果表明二者结合后各自的效果没有减弱,相反有一定程度的增强。②优化出拟开发的新型抗菌止血模型,得出了理论上较好四层贴剂模型。由被衬层,含α部分压敏胶层,精油层及防粘层组成。结论:青蒿乙醇粗提物经一系列的萃取,过聚酰胺柱,MCI凝胶柱,薄层色谱等分离纯化手段进行筛选,最终确定α部分为青蒿止血活性部位;通过精油与α部分混合的初步实验,验证将两者共同作为物质基础开发出具有抗菌止血性能的剂型具有理论可行性。同时,四层贴剂模型的设计为此新型抗菌止血贴剂的开发提供了明确的方向。由于青蒿素主要存在于青蒿提取物的石油醚萃取部分,而本课题所用的精油可以从提取青蒿素的预处理中获得,α部分可以在提取青蒿素后的残渣中分离到。因此,本课题的研究,一方面可以在对机体进行止血的同时预防感染,为创面止血寻找一种方便易行、更为理想的中药抗菌止血敷料奠定基础;另一方面,由于所用活性物质均可以在看做是提取青蒿素后的副产品,一定程度上扩大了青蒿的综合利用度。