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目的近期研究报道:Toll样受体7(Toll like receptor 7,TLR7)激动剂可通过上调Th1(T helper type 1,Th1)细胞因子的释放和抑制Th2细胞功能,有效改善过敏性鼻炎(Allergic Rhinitis,AR)的症状。有关基因方面的研究显示:TLR7的基因变异与AR基因密切相关。然而,AR患者血液嗜碱性粒细胞中TLR7表达情况尚未明确。因此本研究检测AR患者外周血嗜碱性粒细胞及过敏原激发KU812(Human peripheral blood basophilic leukemia cells,KU812)细胞(嗜碱性粒细胞模型)后TLR7的表达,为嗜碱性粒细胞中TLR7在AR发病机制中的作用研究提供实验依据。方法本研究首先以KU812细胞系为研究对象,用ATCC标准RPMI 1640培养基培养。不同浓度的屋尘螨重组蛋白(Dermatophagoides Pteronyssinus 1,Der p1)、卵清白蛋白(Ovalbumin,OVA)、TLR7配体(DSR6434)、白介素-31(Interleukin-31,IL-31)、IL-33(Interleukin-33,IL-33)、IL-37(Interleukin-37,IL-37)、胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)、健康人血浆、屋尘螨过敏原提取物(Dust Mite allergen extract,DAE)、大籽蒿过敏原提取物(Artemisia sieversiana wild allergen extract,ASWE)和AR患者血浆刺激KU812细胞30分钟、2小时和16小时后,收集其细胞和上清。一部分细胞用于流式细胞术检测TLR7表达变化,一部分细胞重悬于Trizol中进行实时定量PCR(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术检测TLR7mRNA表达的变化,上清通过酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测IL-4,IL-6和IL-13等细胞因子的水平。本研究在临床共募集了22例健康人(Healthy Control,HC)、41例AR患者。要求所有AR患者至少两周前停止服用所有抗过敏药物,并且不合并其他过敏性疾病。收集患者及健康人外周血,在ASWE、DAE及梧桐花粉过敏原提取物(Platanus pollen allergen extract,PPAE)激发后,使用流式细胞技术检测AR患者血液嗜碱性粒细胞中TLR7的表达水平。结果屋尘螨过敏原Der p1(Dermatophagoides Pteronyssinus 1,Der p1)和卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)上调了KU812细胞中TLR7蛋白和mRNA的表达并刺激IL-13的产生。同时,DAE、ASWE、IL-31、IL-33、IL-37和TSLP激发KU812细胞2小时后IL-6的释放显著增加。与健康人组(Healthy Control,HC)相比,AR患者血液粒细胞群中TLR7~+CCR3~+(Chemokine CCR receptor3,CCR3)细胞、TLR7~+CD123~+HLA-DR~-(Human Leukocyte Antigen-DR,HLA-DR)细胞和TLR7~+CCR3~+CD123~+HLA-DR~-细胞的百分比均显著增加,AR患者血液单个核细胞群中TLR7~+CCR3~+细胞、TLR7~+CD123~+HLA-DR~-细胞和TLR7~+CCR3~+CD123~+HLA-DR~-细胞的百分比均显著增加,AR患者血液粒细胞群中CCR3~+细胞、CD123~+HLA-DR~-细胞和CCR3~+CD123~+HLA-DR~-细胞中TLR7的平均荧光强度(Mean Fluorescence Intensity,MFI)明显增强,AR患者血液单个核细胞群中CCR3~+细胞、CD123~+HLA-DR~-细胞和CCR3~+CD123~+HLA-DR~-细胞中TLR7的平均荧光强度显著增强。结论AR患者血液嗜碱性粒细胞在梧桐、屋尘螨过敏原激发后TLR7的表达显著增强。过敏原OVA、Der p1激发KU812细胞后TLR7的表达显著增强,DSR6434(TLR7激动剂)激发KU812后对TLR7作用不明显。AR可能与部分过敏原上调TLR7的表达有关,嗜碱性粒细胞释放的IL-6和IL-13可能参与这一过程。