金丝小枣抑制转化生长因子β1诱导肺细胞致纤维化作用的研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:zy205806
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本论文主要研究了金丝小枣中多糖的提取工艺以及金丝小枣化学成分对转化生长因子TGF-β1诱导人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549肺纤维化作用的影响。研究内容主要包括以下几个方面:1、化学成分的提取及多糖提取工艺的研究采用液固比15:1(mL:g)、75%乙醇、功率800W、温度60℃、提取时间为30min、重复两次的超声波提取工艺提取金丝小枣中的化学成分,并采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取,分别浓缩,制成浸膏。在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken试验设计和响应面法优化金丝小枣枣渣中多糖的提取工艺,以多糖提取率为考察指标,确定微波提取为最佳工艺,条件为:时间3.0min,功率420W,液固比为25:1(mL:g)。并对提取的粗多糖采用石油醚脱脂、Sevag法脱蛋白、活性炭脱色,制得纯多糖。2、细胞形态学观察在TGF-β1及金丝小枣各成分对A549细胞分别干预24、48h后,倒置显微镜下观察细胞的形态变化。结果发现:在只有TGF-β1干预的情况下,细胞形态逐渐变成梭形,细胞之间的连接变得松散,细胞质的颜色也逐渐变深;在分别加入TGF-β1及总成分、多糖、正丁醇相、乙酸乙酯相干预的情况下,细胞的形态逐渐接近正常的细胞形态,而加入高浓度药物的细胞比加入低浓度药物的细胞更接近正常的细胞形态;在分别加入TGF-β1及氯仿相、石油醚相干预的情况下,加入低浓度药物的细胞形态逐渐接近正常的细胞形态,而加入高浓度药物的细胞开始皱缩,甚至死亡。3、蛋白表达在TGF-β1及金丝小枣各成分对A549细胞分别干预48h后,采用westernblot蛋白印迹和间接免疫荧光两种方法检测肌纤维母细胞纤维连接蛋白Fn-EDA的表达。结果发现:在只有TGF-β1的干预下,Fn-EDA蛋白的表达量较正常细胞明显增加;而在加入TGF-β1及金丝小枣各化学成分的干预下,Fn-EDA蛋白的表达量较只加入TGF-β1的有所下降。结果说明,金丝小枣各成分在适当的浓度范围内,能够抑制Fn-EDA蛋白的表达,从而抑制TGF-β1诱导A549细胞肺纤维化的作用。4、细胞增殖活力检测在TGF-β1及金丝小枣各成分对A549细胞分别干预48h后,采用MTT法检测活细胞的吸光度(A值)。结果发现:在只有TGF-β1的干预下,A值较正常细胞低;而在加入TGF-β1及金丝小枣化学成分的干预下,A值较只加入TGF-β1的A值升高;加入不同浓度总成分的试验组与只加入TGF-β1的实验组相比,其P值均小于0.05,具有统计学意义。结果说明,金丝小枣各成分在适当的浓度范围内,能够抑制TGF-β1诱导A549细胞肺纤维化的作用。经试验研究表明:金丝小枣化学成分对转化生长因子TGF-β1诱导A549细胞肺纤维化具有一定的抑制作用,其作用机制是抑制了肺纤维化初始过程中的上皮细胞-间质细胞转化(ephethlial-mesenchymal transition, EMT)。说明,金丝小枣在抑制肺纤维化方面具有积极的作用。
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