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口腔鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,约占口腔颌面部恶性肿瘤的80%。由于其发病部位多位于体表或接近体表而严重影响患者的生理功能以及社会交往。癌基因的激活与抑癌基因的失活是导致口腔癌的主要病因。口腔癌缺失基因1（deleted in oral cancer-1, DOC-1）是1995年分离出的一个候选抑癌基因,人DOC-1/CDK2AP1基因位于染色体12q24,其cDNA全长1627bp,共编码115个氨基酸,其蛋白产物p12CDK2AP1的分子量为12.4kDa。p12CDK2AP1具有肿瘤生长抑制功能,在口腔鳞癌细胞系中表达缺失。激光捕获显微切割（Lacer Capture Microdissection,LCM）技术是1996年开发的显微镜下从组织切片中分离、纯化单一类型细胞群或单个细胞的技术,可在基本不损伤细胞内分子物质和组织形态的情况下,从细胞群中分离出单个细胞甚至亚细胞结构的技术。近年来在肿瘤分子生物学研究中广泛应用,可与各种基于细胞、DNA、RNA及蛋白质的实验技术相结合,为研究结果的高精确性和可靠性提供了保证。实验目的本课题组前期研究发现,在不同分化程度的口腔鳞癌组织中p12CDK2AP1蛋白及DOC-1/CDK2AP1基因mRNA的表达量存在差异,但由于实验材料为肿瘤及正常组织的标本块,可能受到组织中异质细胞的干扰而影响结果的可靠性和精确性,本实验研究的目的是通过LCM技术与半定量RT-PCR相结合的方法,来精确检测DOC-1/CDK2AP1基因在不同分化水平的口腔鳞癌患者的肿瘤细胞、间质细胞及正常细胞中的mRNA的表达含量是否有区别,为口腔鳞癌的分子诊断、治疗提供依据。实验方法1.使用激光捕获显微切割技术（LCM）对口腔鳞癌的肿瘤细胞、间质细胞及正常细胞进行纯化,获得高度纯化的单一目的细胞群。2.设计DOC-1/CDK2AP1基因及内参照β-actin的特异性引物,采用半定量RT-PCR的方法检测不同分化水平的口腔鳞状细胞癌组织中的肿瘤细胞、间质细胞和正常口腔细胞中DOC-1/CDK2AP1基因mRNA的表达情况。3.PCR所得产物经过琼脂糖凝胶电泳后,利用凝胶成像分析系统测定电泳条带的灰度值,将DOC-1/CDK2AP1与β-actin的灰度值进行对比获得DOC-1/CDK2AP1电泳条带的相对灰度值,对所得相对值进行统计学分析。实验结果DOC-1/CDK2AP1基因在正常细胞、肿瘤间质细胞中的电泳条带相对灰度值分别为1.49±0.07、1.47±0.10,而在低分化、中分化、高分化口腔癌中的相对灰度值分别为0.95±0.08、1.04±0.06、1.25±0.10。统计分析显示:DOC-1/CDK2AP1基因mRNA的表达水平在肿瘤组织间质细胞与正常组织细胞中无明显著性差异;在癌细胞中的表达水平与肿瘤组织间质细胞、正常组织细胞中分别存在显著性差异（P<0.01）,其表达水平显著降低。DOC-1/CDK2AP1基因mRNA在高分化鳞癌中的表达水平高于在中分化鳞癌中的表达水平,存在显著性差异（P<0.01）;高分化鳞癌中的表达水平高于在低分化鳞癌中的表达水平,存在显著性差异（P<0.01）;、DOC-1/CDK2AP1基因mRNA在中分化鳞癌中的表达水平均数高于在低分化鳞癌中的表达水平均数,无显著性差异（P>0.05）。实验结论本实验证实DOC-1/CDK2AP1基因mRNA在口腔鳞癌中表达下调,与肿瘤的恶性程度有一定相关性,中低分化鳞癌中的表达水平低于高分化鳞癌,中低分化鳞癌中的表达水平无显著性差异,考虑样本量低。