rhBMP-2修饰的β-磷酸三钙/胶原材料诱导成牙性能的初步研究

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背景牙齿再生是再生医学的一个重要分支,也是近年来口腔医学领域的一个研究热点。通过应用组织工程学的原理与方法,研究者们已经可以在动物的颌骨内再生出具有与天然牙完全相同组织结构的牙齿。但要实现完整功能牙的再生,仍有很多困难需要克服。作为组织工程的三大要素之一,支架材料在组织工程的研究中具有非常重要的作用。适宜的支架材料能够为细胞提供附着、增殖、分化以及细胞外基质形成的骨架,从而影响细胞的活动。因此,寻找一种适用于牙组织工程的支架材料对于完整功能牙的再生具有重要的意义。目的对已有纳米β-磷酸三钙/胶原材料进行生物修饰,将修饰后的材料作为支架应用于牙组织工程的研究中,初步探讨其在牙组织工程中所发挥的作用,评价其作为牙组织工程支架材料的可行性。方法将纳米级的β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate, β-TCP)粉末与胶原(Collagen)在强碱性水溶液中复合,制作成β-磷酸三钙/胶原(β-TCP/COL)复合物,并与重组入BMP-2(recombinant human BMP-2, rhBMP-2)复合,制备牙组织工程支架材料。体视显微镜下分离新生SD鼠的下颌骨,取牙胚并将其消化成细胞悬液,与支架材料复合培养制备组织工程牙胚。通过扫描电镜观察、细胞黏附率测定和MTT测定细胞增殖情况来评价支架材料对牙胚细胞体外生长的影响。将组织工程牙胚植入SD大鼠肾被膜下作为实验组,另分别植入单独牙胚细胞团块(细胞对照组)及单独支架材料(材料对照组)作为对照,植入8w后取出标本进行大体观察、组织学及免疫组织化学检测。结果扫描电镜示多孔β-TCP/COL支架材料呈疏松多孔状,质地柔软,亲水性良好;牙胚细胞可紧密贴附于材料,生长状态良好。牙胚细胞接种至支架材料上经4、8、12h孵育后,细胞黏附率分别为27.20%±2.37%、44.52%±1.87%、73.81%±4.15%。MTT示实验组与对照组细胞增殖情况相似,差异无统计学意义(P>0.05)。植入物移植于大鼠肾被膜下8w后可见有白色钙化物形成。实验组可见明显的牙样形态及典型的釉牙本质样结构形成,细胞对照组也可见釉质和牙本质样结构,但排列相对紊乱;免疫组织化学结果证实了牙样结构中牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein, DSPP)的存在。结论经rhBMP-2修饰的β-TCP/COL支架材料与牙胚细胞生物相容性良好,作为一种纳米级的生物活性支架材料,有希望成为未来牙组织工程的一种可选的支架材料。
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