扇贝抗氧化活性肽的制备及其活性的研究

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氧化是导致人类疾病和发病的主要原因之一。例如,自由基攻击蛋白质、脂质以及核苷酸导致细胞损伤和凋亡,进而可导致组织损伤,引起机体衰老,诱发肿瘤等恶性疾病。本质上,所有的细胞组分和特定的成分都易受到自由基的影响。经过大量研究证明,抗氧化肽能够起到清除自由基、螯合金属离子等作用。而扇贝(Scallop)在我国是重要的海洋贝类资源,从北到南贯穿整个沿海地区都大量生产。不但营养丰富,美味可口,而且还具有多种保健功能。因此本文选用栉孔扇贝(Chlamys farreri)作为研究对象,利用生物酶解法制备扇贝抗氧化活性肽,进而研究其对秀丽隐杆线虫(C. elegans)寿命的影响。本文选用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和复合风味蛋白酶,通过三种酶解方式(单酶酶解、复配酶酶解和分段酶解)对扇贝蛋白进行酶解。并以扇贝蛋白酶解液的羟基清除能力和多肽得率作为主要考察指标、水解度为参考指标,对三种酶解方式进行比较分析,从而确定制备扇贝蛋白抗氧化活性肽的最佳酶解方式是单酶酶解中的胰蛋白酶酶解;通过正交设计助手IIV3.1对扇贝蛋白的酶解条件进行优化,获得制备扇贝蛋白抗氧化活性肽的最佳酶解工艺。在此条件下制得的扇贝蛋白酶解液的羟基清除能力(SA)为91.09%,半数抑制浓度(SC50)为35%,肽得率为56.69%,水解度(DH)为73.25%。将最佳酶解条件下制备的扇贝蛋白酶解液进行超滤、分子筛层析(SEC,Superdex Peptide10/300GL)及高效液相色谱(HPLC,Zorbax300SB-C184.6×2505μm)等分离纯化方法的处理,从而得到较高纯度的抗氧化活性肽,其分子量为0.1-5KD,并推测其肽链长度为4-14个氨基酸。以秀丽隐杆线虫作为长寿实验的研究对象,通过在线虫培养基中分别加入三种不同浓度(占培养基比例分别为0.1%、1%和10%)的扇贝蛋白酶解液和经分离纯化后得到的具有较高抗氧化活性的扇贝蛋白肽(<10KD)喂养线虫,与大肠杆菌OP50对照组进行对比;在线虫寿命期间,对线虫存活、死亡的数量及活性等进行观察和记录,并利用SPSS软件对其记录的数据进行处理与分析,最终得出结论即扇贝蛋白抗氧化活性肽(<10KD)对线虫寿命具有较为显著的延长效果。
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