大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)是危害最严重的食源性致病菌之一。近年来日本、欧美等许多国都有多次爆发流行及散发病例报道，我国也有中毒事件发生，对人类健康构成严重威胁。由于E.coli O157:H7感染剂量极低，毒性较强，死亡率高，且目前还没有特效疫苗。因此建立特异、灵敏及快速的E.coli O157:H7检测方法显得尤为重要。　　 酶免疫传感器是快速检测致病微生物的新方法，它将免疫特异识别与电化学催化分析有机结合，具有快速、灵敏、特异、高效的特点，在食品致病菌检测方面已有研究，并己取得良好效果。　　 本论文主要围绕以下五个方面开展了研究工作：　　 1基于多壁碳纳米管/海藻酸钠复合物的大肠杆菌O157:H7直接法酶免疫传感器的研究　　 为快速检测大肠杆菌O157:H7，通过物理吸附法将辣根过氧化物酶标记的大肠杆菌O157:H7抗体固定在多壁碳纳米管/海藻酸钠复合物修饰的四通道丝网印刷碳电极表面，制得快速检测大肠杆菌O157:H7的酶免疫传感器。采用原子力显微镜表征不同修饰电极的表面形态，循环伏安法考察不同电极的电化学特性，一步直接免疫法检测大肠杆菌O157:H7，根据免疫反应前后还原峰峰电流的降低值来检测样品中的大肠杆菌O157:H7。在优化的实验条件下，酶免疫传感器与大肠杆菌O157:H7浓度的对数在103～1010cfu/mL范围内保持良好的线性关系，检出限为2.94×102cfu/mL(S/N=3)。该酶免疫传感器具有较好的特异性、重现性、稳定性和准确性，可望初步用于大肠杆菌O157:H7的快速筛检。　　 2基于多壁碳纳米管/海藻酸钠复合物的大肠杆菌O157:H7夹心法酶免疫传感器的研究　　 采用多壁碳纳米管/海藻酸钠复合物修饰四通道丝网印刷电极，通过物理吸附法法先将大肠杆菌O157:H7抗体固定在修饰电极表面，构建了一种检测大肠杆菌O157:H7的夹心法免疫传感电极，以循环伏安法法考察不同修饰电极表面的电化学特性，并通过正交试验优化了检测条件。在优化的实验条件下，酶免疫传感器与大肠杆菌O157:H7浓度的对数在104～109cfu/mL范围内保持良好的线性关系，检出限为4.46×104cfu/mL(S/N=3)。该酶免疫传感器还具有较好的特异性、重现性、稳定性和准确性。　　 3基于多壁碳纳米管/海藻酸钠复合物的大肠杆菌O157:H7间接法酶免疫传感器的研究　　 本试验在四通道丝网印刷电极基础上采用多壁碳纳米管/海藻酸钠复合物为固定载体，制备了一种检测大肠杆菌O157:H7的间接法免疫传感电极。采用循环伏安法法考察不同修饰电极表面的电化学特性，并优化了检测条件。在优化的实验条件下，酶免疫传感器与大肠杆菌O157:H7浓度的对数在104～109cfu/mL范围内保持良好的线性关系，检出限为3.45×103cfu/mL(S/N=3)。　　 4基于多壁碳纳米管/海藻酸钠/羧甲基壳聚糖复合物的大肠杆菌O157:H7酶免疫传感器的研究　　 首次采用多壁碳纳米管/海藻酸钠/羧甲基壳聚糖复合物包埋辣根过氧化物酶标记的大肠杆菌O157:H7抗体固定在四通道丝网印刷碳电极表面，构建了一次性大肠杆菌O157:H7酶免疫传感电极。制备的多壁碳纳米管/海藻酸钠/羧甲基壳聚糖复合物具有较好的成膜性，能很好的吸附固定生物活性物质并保持其活性。采用原子力显微镜表征不同修饰电极的表面形态，循环伏安法考察不同电极的电化学特性，采用一步免疫法大肠杆菌O157:H7和循环伏安法监测酶促反应，根据免疫反应前后还原峰峰电流的降低值来检测样品中的大肠杆菌O157:H7。在优化的实验条件下，酶免疫传感器与大肠杆菌O157:H7浓度的对数在104～1010cfu/mL范围内保持良好的线性关系，检出限为3.62×103cfu/mL(S/N=3)。该酶免疫传感器具有较好的特异性、重现性、稳定性和准确性，可望初步用于大肠杆菌O157:H7的快速筛检。　　 5大肠杆菌O157:H7和阪崎肠杆菌免疫传感器初级阵列的研究　　 本试验采用四通道丝网印刷碳电极作为支持电极，一步法直接将多壁碳纳米管/海藻酸钠/羧甲基壳聚糖/辣根过氧化物酶标记抗大肠杆菌O157:H7抗体和多壁碳纳米管/海藻酸钠/羧甲基壳聚糖/辣根过氧化物酶标记抗阪崎肠杆菌抗体固定在修饰电极表面，构建了同时检测大肠杆菌O157:H7和阪崎肠杆菌的免疫传感器初级阵列，采用原子力显微镜进行形态学表征，循环伏安法考察不同电极的电化学特性，并优化了检测条件。利用该方法制作的一次性免疫传感器阵列综合了多壁碳纳米管、海藻酸钠/羧甲基壳聚糖、四通道丝网印刷碳电极等多方面的优势，很好的避免了工作电极间的交叉反应，检测过程简便，且具有较好的特异性、重现性、稳定性和准确性。