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鸡传染性贫血病（Chicken infectious anemia,CIA）是一种由鸡贫血病毒（Chicken anemia virus,CAV）引起的以再生障碍性贫血和广泛性淋巴组织萎缩为特征的免疫抑制疾病。研究CAV致病机理和机体抗该病毒感染免疫机制对防控CIA具有重要意义。MAB21L1蛋白（Male abnormal gene family-21-like 1 protein,雄性异常基因家族21样1蛋白）与环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（Cyclic GMP-AMP synthase,c GAS）同属于MAB21家族蛋白,具有相同的MAB21结构域。本实验室前期研究发现,CAV感染MDCC-MSB1细胞（Marek’s disease virus-transformed lymphoblastoid cell line,马立克病肿瘤淋巴母细胞系）后,可激活c GAS-STING天然免疫信号通路。MAB21L1作为c GAS的同源蛋白,是否也能通过天然免疫信号通路而发挥抗CAV感染作用尚不清楚。为了体外研究鸡MAB21L1基因（chMAB21L1）的功能,首先需要建立能够持续表达该基因的稳转细胞系作为研究模型。对此,本课题以chMAB21L1基因为研究对象,检测CAV感染后chMAB21L1基因的转录表达情况,制备chMAB21L1蛋白的特异性抗体,建立能够持续表达chMAB21L1基因的稳转细胞系。主要研究内容与结果总结如下:1)CAV体外诱导chMAB21L1基因转录表达水平的检测。论文中以1×101.33TCID50的CAV感染MDCC-MSB1细胞,分别于感染后0 h、6 h、12 h和24 h收集感染细胞,采用RT-q PCR检测chMAB21L1基因在MDCC-MSB1细胞中的转录表达水平。结果显示,与感染后0 h相比,感染后6 h该基因转录水平显著上调,12 h和24 h后达到极显著上调水平,表明chMAB21L1蛋白是一种CAV感染相关蛋白。2)chMAB21L1基因重组表达质粒构建及其多克隆抗体制备。论文中首先采用酶切酶连法构建原核表达重组质粒p ET-32a-chMAB21L1,并对其进行诱导表达。然后,采用切胶方法纯化rchMAB21L1蛋白,并经PEG20000浓缩后获得浓度为1 mg/m L的rchMAB21L1蛋白。最后,以150μg rchMAB21L1抗原/只的免疫剂量对6周龄雌性Balb/c小鼠进行免疫接种,共免疫四次,每次间隔两周。第4次免疫后7 d对小鼠进行摘眼球采血分离免疫血清,采用间接ELISA和免疫琼脂扩散试验检测免疫血清中特异性抗体的效价,最终获得ELISA效价为1:65536(1:216),琼扩效价为1:16的鼠抗chMAB21L1多克隆抗体,可用于稳转细胞系的鉴定。3)稳定表达chMAB21L1基因的DF-1细胞系建立。论文中首先采用基因同源重组技术构建chMAB21L1基因重组慢病毒表达载体。然后,采用磷酸钙转染法将该重组慢病毒表达质粒与病毒包装辅助质粒（ps PAX2、p MD2.G）共同转染到HEK293T细胞中进行重组慢病毒包装,并通过超高速离心浓缩重组慢病毒。最后,以重组慢病毒感染DF-1细胞,用浓度为1μg/m L的嘌呤霉素进行稳转细胞系筛选,并在转录水平和蛋白水平对其进行鉴定。结果显示:（1）chMAB21L1基因的重组慢病毒表达载体经PCR与双酶切鉴定,均得到与目的基因预期大小相符的DNA条带,且测序序列无任何突变与缺失,表明该重组慢病毒表达载体构建成功;（2）重组慢病毒表达载体转染后的293T细胞可表达绿色荧光蛋白,细胞内chMAB21L1基因在转录与蛋白水平均有表达,并从重组慢病毒基因组中也检测到chMAB21L1基因,表明重组慢病毒包装成功。（3）经嘌呤霉素筛选后的DF-1细胞,连续传至15代后仍能持续表达绿色荧光蛋白,且细胞内chMAB21L1基因的转录表达水平与蛋白表达水平均显著高于对照组细胞,表明chMAB21L1基因已整合到DF-1细胞基因组,稳定表达chMAB21L1基因的DF-1细胞系构建成功。综上所述,CAV感染能够诱导chMAB21L1基因转录表达水平显著上调。在构建原核表达重组质粒p ET-32a-chMAB21L1基础上,成功制备出鼠抗chMAB21L1抗体。采用重组慢病毒感染法成功建立稳定表达chMAB21L1蛋白的DF-1细胞系。