以自主筛选的产1,3-丙二醇菌株为基础，研究了甘油脱水酶的催化反应特性，通过克隆和表达甘油脱水酶与复活因子，定量研究了复活因子和其它因素与失活甘油脱水酶的复活关系。通过研究得剑以下结果： 从新疆特殊环境土壤中筛选到在厌氧条件下能够转化甘油生成1,3-丙二醇的菌株XJPDLi-2，经鉴定后命名为K. pneumoniae XJPD-Li(缩写 XJPD-Li)。摇瓶发酵实验确定其最佳发酵条件为：温度40℃，pH8.0，硫酸铵6.0g/L，底物甘油20g/L利葡萄糖2.5 g/L。5L发酵罐批式发酵表明该菌在8h内可消耗20g/L甘油，1,3-丙二醇浓度达12.2 g/L，甘油的摩尔转化率达理论值0.75。补料批式发酵发现48h可消耗66.4g/L甘油合成38.1g/L的1,3-丙二醇，转化率达0.70，表明XJPD-Li菌是具高转化率的1,3-丙二醇生产菌株。 以XJPD-Li菌甘油脱水酶为酶源研究了其酶促反应特性。结果表明该酶的表达合成与菌体生长呈现明显的耦合关系。催化反应的最适温度为40℃，且在40℃以下酶的稳定性较好。最适pH值为8.0，在6.0～8.0之间甘油脱水酶活性较高，稳定性也好。Na<+>、Mg<2+>、Mn<2+>和Fe<2+>对甘油脱水酶催化反应具有一定促进作用，而Ca<2+>、Co<2+>、Fe<3+>、Zn<2+>和Cu<2+>对其活性均有抑制作用。该酶分别以甘油和1,2-丙二醇为底物时最高反应浓度分别为0.15mol·L<-1>和0.3mol·L<-1>左右，动力学常数K<,m>分别为5.57mmol·L<-1>和8.16mmol·L<-1>。研究也表明该酶催化反应的活化能E<,a>为18.904kJ·mol<-1>。 利用PCR方法从XJPD-Li基因组DNA中分别克隆山甘油脱水酶基冈dhaBCE和甘油脱水酶复活因子基闪dhaFG片段。分别构建表达载体PET-28a(+)-dhaBCE利PET-28a(+)-dhaFG后转化E.coli BL21(DE3)，在25℃、OD<,600>为0.6时用0.4mMIPTG诱导后均成功表达出具有生物活性的目标蛋白，诱导5小时后重组菌中甘油脱水酶活力达299U·mg<-1>，约为原始菌的300倍。重组菌中复活因子可使甘油和氧失活的脱水酶活力均恢复90％以上。 重组菌中甘油脱水酶在以甘油为底物催化反应时，3min酶活就损火约35％，1h后活性仅剩2.7％；通氧时其活性损失更快，3min损失48％，1h后仅剩1.5％。通过定量研究甘油失活脱水酶的复活效果确定其最佳的复活条件为：ATP 50mmol·L<-1>、Mg<2+>10mmol·L<-1>、辅酶B<,12>3 μmol·L<-1>、甘油脱水酶与复活因子的质量比4：1，在此条件下甘油和氧失活脱水酶的活力可分别恢复98.9％和97.3％。各因子对甘油脱水酶的复活贡献程度研究表明，脱水酶与复活因子质量比和ATP对脱水酶有效复活的贡献程度最大，但四种因子均是甘油脱水酶复活的必需因子。复活动力学研究表明在ATP、Mg2’和辅酶B12存在情况。卜，复活冈子均能快速复活甘油和氧火活的脱水酶，且反应前10min复活速率较大，甘油失活脱水酶更易复活，复活反应60min后丙醛的积累量是氧失活脱水酶复活后的1.5倍。 通过基因工程手段获得甘油脱水酶并进行催化失活与复活关系研究，将为构建新的甘油脱水酶体外催化与复活体系提供依据，也为 1,3-丙二醇的生物合成调控提供理论指导，对促进生物法合成1,3-丙二醇的工业化进程具有重要意义。