云南白药主要成分的骨形成作用研究

来源 :昆明医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kyleSun81
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目的:探讨云南白药主要成分的骨形成作用、软组织修复作用机理,了解白药对骨组织基质矿化、骨生长因子的调节、刺激或增加作用。筛选出既有明显骨形成作用又有较低局部毒性的主要成分,为探索云南白药可能的新配伍提供理论基础。方法:1、SD大鼠骨髓基质细胞分离培养:将12周龄的SD大鼠拉颈处死,无菌条件下取动物的胫骨和股骨骨髓,加入含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基,在37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养。细胞增殖到80%时,胰蛋白酶消化,传代。取第3代细胞试验用。2、第3代细胞以2.5×10~4/cm~2浓度接种于6孔培养板,每孔加入云南白药原成分A、B、C、D、E、F、G、H、I、J和BMP(阳性对照)各5ug,于1、3、5、7、14天时收集细胞。绘制骨髓基质细胞生长曲线,评估药物毒性;碱性磷酸酶含量检测及碱性磷酸酶染色评价白药对骨髓细胞分化的作用;Von Kossa钙化结节染色评价白药的促成骨能力;RT-PCR检测骨髓基质细胞内BMP-2、BMP-4、BMP-7、ON、OPN、osterix、TGF-β1及BSP的mRNA表达水平。结果:试验组细胞增殖均较对照组小;E、G、H、I、J组细胞碱性磷酸酶含量较高,与对照组相比差别显著(P<0.05);E、G、H、I、J组与对照组相比骨基质矿化面积较大,差别显著(P<0.05);A组OPN、osterix,B组BMP-2、osteocalcin,C组BMP-2,D组BMP-2、BSP、osteocalcin,G组BMP-2、BSP,H组TGF、BMP-2、OPN,I组TGF、BMP-2、BSP,J组TGF、BSP、BMP-2 mRNA表达均高于对照组。结论:1.云南白药原药成分E、G、H、I、J毒性较小,并能明显增加骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性,促进钙化结节的形成,可能为云南白药骨形成作用的主要原药成分。2.其它成分对骨组织基质矿化、骨生长因子具有调节、刺激或增加作用。
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