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目的:观察不同浓度的转化生长因子β2(Transforming Growth Factor-β2,TGF-β2)对牛角膜内皮细胞的抑制增殖作用,并探讨其可能的分子机制。
方法:取新生小牛的角膜内皮细胞进行原代培养,选择传至第3代的牛角膜内皮细胞作试验用。
第一部分:TGF-β2抑制角膜内皮细胞的增殖;
MTT法测定不同浓度TGF-β2(0.1,1,10,100ng/L)分别在作用24、48、72h后对牛角膜内皮细胞增殖的影响。流式细胞仪法检测作用48h后各组的细胞周期情况。
第二部分:TGF-β2抑制牛角膜内皮细胞增殖的分子机制;
分别设定阴性对照组和含不同浓度的TGF-β2(0.1,1,10,100ng/L)的四个实验组,各组均作用48h,用RT-PCR法和Western blotting法分别检测p27Kip1基因和蛋白的表达。
结果:不同浓度的TGF-β2在作用24~72h均能不同程度地抑制牛角膜内皮的增殖,其中0.1~1ng/L的TGF-β2 作用48h抑制效果最明显。作用48h,0.1和1ng/LTGF-β2组G0/G1周期细胞所占比例与阴性组相比有统计学差异,p27Kip1的mRNA和蛋白表达明显增强。
结论:TGF-β2在0.1~1ng/L的浓度下作用48h对牛角膜内皮细胞具有显著增殖抑制作用,其抑制作用可能与上调细胞周期蛋白P27相关。