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c-Myc是一种重要的原癌基因,它可以作为一种转录因子,在维持胚胎干细胞的生物学特性和诱导多性干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)形成的过程中发挥重要的作用。因此制备其相应的多克隆抗体和单克隆抗体非常必要,这将为进一步研究山羊ES细胞和iPS细胞的自我更新机制奠定基础。试验1.以pMD18T-Myc质粒为模版,PCR扩增c-Myc片段,然后将其亚克隆到pSE380表达载体上,获得pSE380-Myc重组质粒。该质粒转化工程菌BL21(DE3), IPTG诱导表达His-Myc融合蛋白,随后用SDS-PAGE电泳及Western blot加以验证。在变性条件下用Ni-NTA argrose介质分离纯化His-Myc融合蛋白,并以此为抗原皮下注射新西兰大白兔,间隔2-3周注射1次,共4次。最后一次免疫后7天,采血分离血清,用VVestern blot检测抗体特异性。结果表明：(1)pSE380-Myc重组质粒在工程菌BL21(DE3)得到了高效表达；(2)得到了高纯度高含量的His-Myc融合蛋白；获得的多克隆抗体与His-Myc融合蛋白能够特异性结合。结论：本试验成功获得了特异性山羊c-Myc多克隆抗体。试验2.利用上述纯化的His-Myc融合蛋白做为抗原,免疫7-9周龄的雌性BALB/C小鼠,经过四次免疫后取小鼠脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,应用有限稀释法对其进行3-4次亚克隆,获得稳定分泌抗c-Myc蛋白抗体的杂交瘤细胞株,并将其腹腔注射BALB/C小鼠。7-10天后采集腹水,间接ELISA测定腹水抗体效价,以单克隆抗体亚类鉴定试剂盒测定抗体亚类。结果表明：(1)获得了稳定分泌抗c-Myc蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1F10、2H10和3810,培养液上清抗体效价分别为1：10000、1：8000、1：6000。(2)1F10、2H10两株杂交瘤细胞在小鼠体内诱生的腹水抗体效价分别为1：1280000和1：640000,抗体亚类均属于IgG1类。(3)核型分析表明,杂交瘤细胞的染色体众数为90-100。(4)间接ELISA显示,上述3杂交瘤细胞株体外传代和冻存复苏后的培养液上清OD值基本保持不变,抗体分泌稳定,证明山羊c-Myc单克隆抗体制备取得满意结果。