目的： 构建表达145位甘氨酸→精氨酸(Gly145Arg)变异的乙型肝炎病毒表面抗原(Hepatitis B surface antigen,HBsAg)真核表达质粒,用此质粒转染Hela细胞,建立稳定高效表达G145R HBsAg的细胞系并对该细胞系进行初步的性质鉴定。 方法： 采用PCR定点突变方法,构建了可以在真核细胞表达G145R HBsAg的真核表达质粒PCI-HBVS145。用此质粒转染Hela细胞,经克隆化培养以及G418筛选,建立了9个稳定表达G145R HBsAg的细胞系。对其中蛋白分泌水平最高的Hela 2H6细胞系表达的蛋白性质进行了鉴定,对其分泌动态、细胞纯度、遗传稳定性、外源基因整合等生物学特性做了鉴定。同时对该细胞实验室大量培养的条件进行了优化。 结果： 通过PCR扩增、酶切及测序鉴定表明成功构建表达G145R。HBsAg的真核表达质粒。转染细胞后建立了稳定表达G145R HBsAg的9个细胞系。ELISA检测表明G145R HBsAg与野生型HBsAg在免疫反应性上有较大的差异。生物学性状研究结果表明稳定表达G145R HBsAg的2H6细胞纯度好,遗传性状稳定,抽提细胞核酸进行PCR,扩增到与阳性对照大小一致的DNA片段,说明突变的S基因成功整合到细胞基因组中。细胞没有细菌及霉菌的污染；在培养瓶中2H6细胞分泌G145RHBsAg的最佳条件为：200ml培养瓶中细胞生长成单层后维持液20ml,2％NBS DMEM培养基,每四天收集1次。 结论： 成功建立了稳定表达G145R HBsAg的细胞系。该细胞系遗传性质稳定,表达蛋白产量高。此细胞系可用于G145R HBsAg的制备及纯化。