论文部分内容阅读
背景及目的：结直肠癌的发生、发展涉及多种基因的异常改变。已有研究表明,慢性肠道炎症增加了结直肠癌发生进展的危险性,Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)在肠道慢性炎症中发挥关键作用,TLR4可以促进结直肠癌发生、发展,但其机制尚不完全清楚。另外,我们前期研究发现：结直肠癌中Fas配体(Fas ligand, FasL)表达明显升高,可以诱导机体淋巴细胞凋亡,反击机体免疫体统。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)在结直肠癌中表达升高,可以促进结直肠癌的生长和转移。本文拟通过观察TLR4、FasL和EGFR在结直肠癌和正常大肠组织中的表达情况,分析TLR4表达与结直肠癌临床病理学特征的关系,判断其临床意义和预后,分析TLR4表达与FasL和EGFR表达的关系,研究TLR4促进结直肠癌发生发展的机制。方法：采用免疫组织化学法检测2007年至2011年间58例经手术切除后且经病理证实为结肠癌或者直肠癌的标本和25例正常大肠组织中TLR4、FasL和EGFR的表达。所有患者临床资料完整,并且术前均未接受过化疗、放疗或免疫治疗。58例患者中,男38例,女20例,22-83岁,中位年龄61岁；结肠癌56例,直肠癌2例；高分化9例,中分化34例,低分化15例；Duke’s分期：A期14例,B期14例,C期14例,D期16例。25例人正常大肠组织标本均由结肠镜活检取得。TLR4单克隆抗体的工作浓度为1：300,FasL多克隆抗体和EGFR单克隆抗体的工作浓度均为1：400,其余步骤均严格按照试剂盒说明书操作,选用磷酸盐缓冲液替代上述抗体做阴性对照。通过Spearman’s等级相关分析,探讨TLR4与FasL或EGFR表达的关系。通过x2检验分析TLR4在结直肠癌组织中的表达与临床病理学特征的关系。结果：1.TLR4、FasL和EGFR在结直肠癌及正常大肠组织中的表达情况：TLR4表达主要定位于结直肠癌细胞和正常肠粘膜细胞的胞浆和胞膜,胞核无表达,呈黄色颗粒或团块。大部分正常肠粘膜细胞呈阴性表达,少数阳性表达,呈淡黄色颗粒。TLR4在结直肠癌组织中的表达阳性率为59%(34/58),显著高于其在正常大肠粘膜组织中的表达阳性率20%(5/25)(χ2=10.461,P<0.01)。FasL和EGFR主要在结直肠癌细胞的胞质和胞膜表达,细胞核内未见表达。EGFR偶见在结直肠癌间质中表达。阳性表达呈黄色颗粒或团块。FasL和EGFR在结直肠癌中的表达阳性率分别为71%和83%,均明显高于在正常大肠组织中的表达阳性率(分别为22%和31%),差异均有统计学意义(χ2=5.018,P<0.05；χ2=3.708,P<0.05)。2.通过分析TLR4在结直肠癌组织中的表达与临床病理学特征的关系显示,TLR4的表达与结直肠癌患者的年龄、性别、结直肠癌的分化程度和局部淋巴结转移不显著相关,TLR4的表达与结直肠癌的远处转移具有相关性(X2=4.063,P<0.05)。3.通过分析TLR4表达与FasL、EGFR表达的关系得出,TLR4和FasL表达具有正相关性(r=0.249,P<0.01),而且在同一样本连续切片中,TLR4表达强的部位多伴有FasL的强表达,TLR4表达弱的部位也常伴随FasL的弱表达。TLR4与EGFR的表达不具有相关性(r=0.345,P>0.05),并且在同一样本连续切片中,TLR4和EGFR的表达部位也基本不一致。结论：1.TLR4表达与结直肠癌远处转移有关,提示TLR4可能促进结直肠癌转移。该指标可以作为判断结直肠癌远处转移的依据之一2.TLR4在结直肠癌组织中的表达与FasL具有正相关性,TLR4的表达随FasL的表达增强而增强。结合文献报道,推测TLR4可能通过调控FasL的表达,参与结直肠癌的免疫反击,促进结直肠癌的生长和转移。3.本实验中TLR4在结直肠癌组织中的表达与EGFR的表达不具有相关性。TLR4的表达与EGFR之间的关系有待进一步研究。