【摘 要】
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目的:转化生长因子β1（TGF-β1）作为TGF-β超家族的重要一员,具有调节细胞生长、分化、凋亡和迁移等多功能生物学活性,是肾纤维化的重要介质,但其具体机制尚不明确。课题组前期实验筛选出lnc RNA uc.412,成功转染大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）,为研究其在肾小球系膜细胞中的生物学功能奠定基础,为进一步探索其与肾小球系膜细胞增殖相关性肾病的相关性创造了可能性。本研究旨在探讨TGF-β
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目的:转化生长因子β1（TGF-β1）作为TGF-β超家族的重要一员,具有调节细胞生长、分化、凋亡和迁移等多功能生物学活性,是肾纤维化的重要介质,但其具体机制尚不明确。课题组前期实验筛选出lnc RNA uc.412,成功转染大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）,为研究其在肾小球系膜细胞中的生物学功能奠定基础,为进一步探索其与肾小球系膜细胞增殖相关性肾病的相关性创造了可能性。本研究旨在探讨TGF-β1是否可以通过Smads通路,上调lnc RNA uc.412的表达,从而诱导大鼠肾小球系膜细胞表型改变和细胞外基质合成增加,促进肾纤维化,为临床防治与肾纤维化相关的慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）提供新型思路。方法:体外培养HBZY-1细胞,根据预实验研究选定Smad3磷酸化特异性抑制剂SIS3（1μmol/L）、TGF-β1（10 ng/m L）进行实验。将细胞随机分为四组:对照组（基础培养基）、TGF-β1组（TGF-β1 10 ng/m L）、TGF-β1+SIS3组（TGF-β1 10ng/m L+SIS3 1μmol/L）、SIS3组（SIS3 1μmol/L）,干预24小时后收集细胞,Western blotting法检测I型胶原蛋白（Collagen 1）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、p-Smad3蛋白表达水平;Real-time PCR法检测lnc RNA uc.412表达水平。利用慢病毒过表达lnc RNA uc.412后转染HBZY-1细胞,Western blotting法检测Collagen1、α-SMA蛋白表达水平,Real-Time PCR法检测Collagen 1及α-SMA m RNA水平的变化。结果:1、Western blotting结果提示:与对照组相比,TGF-β1组HBZY-1细胞内p-Smad3蛋白以及纤维化相关蛋白Collagen 1、α-SMA蛋白表达水平均明显上升（P<0.05）;与TGF-β1组相比,TGF-β1+SIS3组系膜细胞内p-Smad3蛋白以及Collagen1、α-SMA蛋白表达水平均明显下降（P<0.05）。成功构建lnc RNA uc.412过表达系膜细胞模型,与对照组相比,空载组系膜细胞α-SMA及Collagen 1蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）;与空载组相比,过表达组系膜细胞α-SMA及Collagen 1蛋白表达水平显著上升（P<0.05）。2、Real-time PCR结果提示:与对照组相比,TGF-β1组HBZY-1细胞内lnc RNA uc.412表达水平明显上升（P<0.0001）;与TGF-β1组相比,TGF-β1+SIS3组系膜细胞内lnc RNA uc.412表达水平明显下降（P<0.0001）。成功构建lnc RNA uc.412过表达系膜细胞模型,与对照组相比,空载组系膜细胞α-SMA及Collagen1 m RNA表达水平无明显变化（P>0.05）;与空载组相比,过表达组系膜细胞α-SMA及Collagen 1 m RNA的表达水平显著上升（P<0.05）。结论:1、TGF-β1可以通过Smads信号通路上调lnc RNA uc.412表达,抑制Smads信号通路可下调lnc RNA uc.412。2、过表达lnc RNA uc.412使Collagen 1、α-SMA蛋白及m RNA表达上调,说明lnc RNA uc.412促进系膜细胞表型改变和增加细胞外基质的合成,从而促进肾纤维化的发生。
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