目的:近年来微粒(microparticle,MP)已逐渐成为生物学和医学领域的一个研究热点,目前各项相关实验中,涉及到了多种不同的提取MP的方法。已有研究表明,创伤性脑损伤(Traumatic brain injury,TBI)之后产生的脑源性微粒(brain-derived microparticles,BDMP)对于脑创伤后患者的病理生理变化过程有着很重要的影响。在本实验中,通过建立小鼠的中度脑创伤模型,并分别使用研磨法、木瓜蛋白酶消化法、吹打法等不同方式提取小鼠TBI创伤灶来源的微粒,并检测、比较此三种不同的方法所提取出的小鼠BDMP在提取效率、促凝血活性、微观形态、粒径大小及分布情况上的差异。试图通过分析和比较探讨不同方法提取微粒的特性,为后续的微粒的研究提供一个方法学上的参考和方向。方法:(1)应用液压打击(FPI)仪器建立小鼠的中度TBI模型;(2)使用研磨法进行组织匀浆及分步离心,提取小鼠的脑源性微粒;(3)使用木瓜蛋白酶消化及分步离心的方法提取小鼠的脑源性微粒;(4)使用吹打法并分步离心提取小鼠的脑源性微粒;(5)应用流式细胞计数的方法,检测不同方法提取的BDMP的数量,并比较其提取效率;(6)应用流式细胞学的方法检测各组BDMP的GFAP、NSE、AnnexinⅤ和Mito-Tracker Green的表达阳性率;(7)应用凝血仪检测凝血酶原时间(PT),比较三种不同方法提取的脑源性微粒的促凝血作用;(8)应用透射电子显微镜观察三种方法提取的BDMP的微观形态和大小;(9)应用NanoSight纳米颗粒分析仪检测和对比各种方法提取的BDMP的粒径大小分布情况。结果:(1)研磨法和木瓜蛋白酶消化法和吹打法在BDMP的提取效率上存在统计学差异,其中研磨法和使用酶消化法的BDMP提取效率接近且较高,吹打法的提取BDMP的效率最低;(2)使用此三种不同方法提取的Mito-Tracker Green、NSE、GFAP阳性BDMP数量具有差异;(3)各组BDMP的促凝血活性不同,其中酶消化法提取的BDMP凝血活性显著高于吹打法提取和研磨法提取的BDMP,而研磨法吹打法BDMP之间相差较小;(4)使用透射电子显微镜所观察和拍摄到的不同方法提取的BDMP其形态结构和粒径大小都没有明显差别;(5)利用NanoSight纳米颗粒分析仪检测的以上6组BDMP粒径分布差异较小,但微粒粒径的平均值研磨法的BDMP明显小于酶消化法和吹打法的BDMP。结论:本试验研究表明,应用不同的方法提取出的小鼠脑组织微粒在提取的效率、所产生的微粒的促凝血功能及其微观形态学特征等方面均存在一定的差异。应用较为广泛的组织匀将研磨提取微粒的方法,比使用酶消化或机械吹打的方法的微粒提取效率高。而使用研磨法提取的微粒平均粒径小于其他两种方法提取的微粒。本实验中的几组BDMP在细胞来源、促凝血活性等方面也存在着一定的差异。本实验可以为今后的实验研究中根据不同需要采取不同的方法提取微粒提供一个参考和新思路。