论文部分内容阅读
牛病毒性腹泻/黏膜病(Bovine viral diarrhea-mucosal disease, BVD/MD)是由牛病毒性腹泻病毒(ovine Viral Diarrhea Virus, BVDV)(?)感染牛引起的以发热、腹泻、急、慢性黏膜病及怀孕母牛流产或产死胎、畸胎,持续性感染与免疫耐受为主要特征的一种传染病,发病率高而死亡率低。近年来,该病的广泛流行已经给世界养牛业造成了巨大的经济损失。BVDV不仅能引起动物发病,还是生物制品(血清、疫苗、干扰素)的主要污染源之一。由于商品血清常用于细胞培养,且很多细胞对BVDV较为易感,因此血清中若污染BVDV会给实验室诊断和相关研究造成很大的影响。本研究通过对某商品化血清中污染的BVDV进行了连续传代和蚀斑纯化,分离得到纯化的病毒,并命名为HLJ-10株。对分离得到的病毒进行形态观察、理化特性和相关生物学特性的研究。病毒在体外细胞嗜性研究表明该病毒在MDBK和BL细胞上生长状态良好,能感染PK-15细胞,而不感染MDCK、Vero和BHK-21细胞。通过对HLJ-10株和参考株NADL生长曲线的绘制,显示前者病毒滴度低于后者,而病毒的复制特点和增殖特性基本相同。参考GenBank上已发表的BVDV全基因组序列,设计了覆盖全基因组的数对引物,通过RT-PCR方法,对该毒株全基因组进行分段克隆及序列测定。生物信息学分析表明,该毒株为BVDV基因2型,基因组全长12284个碱基,其中编码区为11694nt,共编码3897个氨基酸,5’和3’非编码区(UTR)分别为385nt和205nt。基因组序列已上传到GenBank中,登录号为JF714967。基于5’UTR区220个核苷酸序列,构建的进化树,显示HLJ-10株与SH-28和KZ91CP两株进化关系较为密切。利用RT-PCR(?)(?)ELISA技术对几种商品化血清和细胞疫苗进行了检测,发现中一种血清存在BVDV污染,而细胞疫苗中未发现BVDV污染。