发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopeniasyndrome virus，SFTSV)属于布尼亚病毒科白蛉病毒属，作为一种新发的病毒，人们对其感染过程以及引起的机体免疫反应了解较少，SFTSV感染后，患者主要表现为发热、乏力、恶心、呕吐等胃肠道症状。在少数情况下，会引起意识障碍、皮肤瘀斑、消化道出血、肺出血等严重症状，并造成休克、呼吸衰竭、弥漫性血管内凝血(DIC)等多功能脏器衰竭，最终导致死亡。目前，还没有用于临床治疗的药物，所以本研究的目的主要是为了制备人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒-Gn蛋白的基因工程抗体，一方面可以用于病毒感染的临床检测，另外一方面也可以用于抗体药物的制备。　　本研究利用噬菌体表面展示技术筛选出具有特异性以及高亲和性的单克隆抗体，该技术在目前科学研究，疾病诊断以及临床抗体药物的制备中都有成功的先例。所谓的噬菌体抗体库技术就是将Fab或者scFv抗体基因与噬菌体外壳蛋白结构基因相互耦联，使抗体蛋白融合表达在噬菌体外壳蛋白的N端，抗体蛋白能够自发的折叠而呈天然蛋白状态，并且能够保持相对独立的空间结构和生物活性，有利于被靶分子识别以及与靶分子结合，通过“吸附-洗脱-扩增”三轮富集过程，可以从噬菌体抗体库中筛选出特异性针对抗原的单克隆抗体，并且通过各种试验对表达的抗体进行功能鉴定。　　本研究主要分两大部分:　　第一部分:我们分别采用SFTSV-AH12全病毒颗粒和重组表达SFTSV-Gn蛋白对人源抗SFTSV Fab噬菌体抗体库进行富集筛选，分别经过三轮的“吸附-洗脱-富集”过程，随机各挑选了400个克隆，通过ELISA对Fab抗体的结合特异性进行检测。结果显示通过病毒颗粒筛选，我们获得了364株特异性针对SFTSV核蛋白的阳性克隆，并没有获得特异性针对Gn蛋白的阳性克隆;经过包被SFTSV-Gn重组蛋白筛选，我们获得55株与Gn蛋白特异性结合的阳性克隆，经序列分析，总共获得8株唯一序列的阳性克隆，其中5株来自Lambda库，3株来自Kappa库。　　第二部分:将8株Fab抗体可变区基因克隆入单质粒/哺乳动物细胞表达载体HL51-14上，通过PEI转染试剂瞬时转染293T细胞，收集细胞上清获取分泌表达的IgG全抗体，并使用Protein-A亲和层析柱纯化IgG抗体，分别采用ELISA、IFA和Western-blotting方法对IgG全抗体进行功能鉴定，并通过微量中和试验检测IgG抗体的中和活性。结果表明经ELISA、IFA和Western-blotting检测证实这8株IgG抗体均能特异性结合Gn蛋白，且针对的是线性表位，微量中和试验显示8株新筛抗体没有表现出中和活性。通过竞争ELISA试验显示8株IgG抗体与mAb-1C8作用于不同的抗原表位，mAb-1C8已经证实具有中和活性，且结合的抗原表位是构象表位。　　综上所述，通过病毒颗粒筛选出大量针对NP的Fab抗体，并没有筛选得到特异性针对Gn蛋白抗体，表明NP具有强的免疫原性，在SFTSV感染机体免疫中发挥重要作用;通过Gn蛋白筛选得到了抗Gn蛋白抗体，虽然所筛选的抗体没有中和活性，但可以用于病毒的检测以及为后续SFTSV人源单克隆抗体的研究提供参考和借鉴。