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目的在转录水平上建立抗肝癌及逆转MDR中药的多靶点高通量筛选方法。方法采用体外培养人肝癌细胞BEL-7402及其耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-FU,MTT法检测Bel-FU的多药耐药性、5种中药成分的(槲皮素、EGCG、老鼠簕生物碱A、乙酰老鼠簕生物碱A、龙血素B)细胞敏感性以及药物浓度依赖的逆转耐药性;选择与肝癌发生发展相关途径的42个功能基因,采用实时定量PCR微阵列技术检测各中药成分作用于耐药细胞前后的差异表达基因,实时定量PCR检测槲皮素、EGCG、乙酰老鼠簕生物碱A分别作用于Bel-FU后H-ras、MDR1基因表达,以验证微阵列结果。结果Bel-FU对5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、长春新碱、阿霉素、柔红霉素的耐药指数分别为:89.6、3.4、37.2、16.5、3.7倍。槲皮素、EGCG、老鼠簕生物碱A、乙酰老鼠簕生物碱A、龙血素B对Bel-FU的IC50值分别为193.9μM、1230.8μM、507.8μM、244.9μM、163.7μM,对Bel-FU的IC10值分别为58.2μM、159.5μM、75.3μM、64.7μM、25.8μM。43.6、87.2、130.8μM的EGCG对Bel-FU的耐药逆转倍数分别为1.04、1.36、2.10倍;16.5、33、49.5μM的槲皮素对Bel-FU的耐药逆转倍数分别为1.14、1.68、2.38倍;13.2、33、66μM的老鼠簕生物碱A对Bel-FU的耐药逆转倍数分别为1.13、1.54、1.33倍;21、42、63μM的乙酰老鼠簕生物碱A对Bel-FU的耐药逆转倍数分别为1.26、1.78、1.42倍;6、12、24μM的龙血素B对细胞Bel-FU耐药逆转倍数分别为2.25、3.80、5.76倍;阳性对照剂VRP(5μg·mL-1)则为1.11倍。与Bel-7402比较,Bel-FU中的基因H-ras、Bcl-2、PDGFA、MDR1、BCRP表达上调(P<0.05),cyclinB1下调(P<0.05);槲皮素下调Bel-FU中基因H-ras、EGFR、FGF、VEGFA、PDGFA、MDR1、Erk1的表达(P<0.05);EGCG下调Bel-FU中基因H-ras、EGFR、PDGFA、MDR1、VEGFA的表达(P<0.05);乙酰老鼠簕生物碱A下调基因H-ras、VEGFA、PDGFA、C-myc、NF-κB的表达(P<0.05),老鼠簕生物碱A与龙血素B均下调Wnt1、VEGFA的表达(P<0.05)。实时定量PCR结果:槲皮素、EGCG均下调Bel-FU中基因H-ras、MDR1表达(P<0.05),乙酰老鼠簕生物碱A下调Bel-FU中基因H-ras的表达(P<0.05)。结论定量PCR微阵列可作为在转录水平上进行抗肝癌及逆转MDR中药多靶点高通量筛选的方法。目的通过筛选三种中药成分作用于人肝细胞癌MDR细胞前后表达差异的蛋白质点,在检测靶蛋白水平上建立抗肝癌及逆转MDR中药筛选方法。方法采用2-DE及MALDI-TOF-MS技术,检测肝癌敏感细胞Bel-7402与耐药细胞Bel-FU之间的差异蛋白以及三种中药成分作用于Bel-FU前后的差异蛋白,差异倍数为2.5倍以上者定义为差异蛋白。Western blot法检测三种中药成分作用于Bel-FU后蛋白P-gp、FAK、CRT表达。结果与Bel-7402比较, Bel-FU中有24个蛋白表达上调,其中包括FAK、TM3、ORP150、CRT、NSE、80K-H protein、EF-1-D、phosphoprotein等,12个蛋白表达下调;EGCG作用Bel-FU后,下调蛋白FAK、CRT、TM3、80K-H protein、EF-1-D的表达;槲皮素作用Bel-FU后,下调蛋白phosphoprotein、CRT、TM3、EF-1-D的表达;乙酰老鼠簕生物碱A作用Bel-FU后下调蛋白FAK、80K-H protein、CRT、TM3的表达。Western blot检测结果:EGCG、槲皮素均下调P-gp在Bel-FU中的表达(P < 0.05)。EGCG、乙酰老鼠簕生物碱A下调Bel-FU中的FAK的表达(P < 0.05)。经三种中药成分作用后,Bel-FU中的CRT表达均下调。结论EGCG、槲皮素、乙酰老鼠簕生物碱A均具有逆转Bel-FU MDR的作用。运用蛋白质组学技术检测与逆转MDR相关的蛋白质差异表达为MDR逆转剂筛选提供了一个高通量的平台。