【摘 要】
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目的:探寻蛇床子催眠活性组分（CHC）对对氯苯丙氨酸（PCPA）失眠大鼠行为学、松果体损伤的保护作用,观察褪黑素（MT）合成关键酶AANAT的表达变化探讨CHC对松果体保护机制。方法:1.CHC对PCPA失眠大鼠松果体细胞的保护作用雄性SD大鼠随机分为空白对照、模型对照、MT阳性对照（10 mg/kg）、蛇床子催眠活性组分高、中、低剂量（60、30、15mg/kg）共为6组,除空白对照组外,其余各
【基金项目】
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山西省自然科学基金面上项目（201901D111427）；
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目的:探寻蛇床子催眠活性组分（CHC）对对氯苯丙氨酸（PCPA）失眠大鼠行为学、松果体损伤的保护作用,观察褪黑素（MT）合成关键酶AANAT的表达变化探讨CHC对松果体保护机制。方法:1.CHC对PCPA失眠大鼠松果体细胞的保护作用雄性SD大鼠随机分为空白对照、模型对照、MT阳性对照（10 mg/kg）、蛇床子催眠活性组分高、中、低剂量（60、30、15mg/kg）共为6组,除空白对照组外,其余各组腹腔注射PCPA混悬液450mg/kg,每天1次、连续2d建立失眠大鼠松果体损伤模型,各组大鼠于给药后第4、5、6d分别进行自主活动分析、高架十字迷宫、戊巴比妥钠协同睡眠实验,称量造模前后及给药后重量;给药7天后杀检取血、剖取松果体,HE染色观察其组织病理学变化,采用TUNEL原位染色方法观察松果体组织细胞凋亡指数（AI）,流式细胞术分析松果体细胞早期凋亡率,免疫组化方法及图象分析技术检测松果体Bcl-2、Bax蛋白的表达。2.CHC对PCPA失眠大鼠松果体褪黑素合成关键酶AANAT的影响仍选用腹腔注射PCPA混悬液造模,给药结束后采取腹主动脉血和松果体组织,分别采用ELASA检测血清MT浓度,实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测松果体褪黑素关键合成限速酶AANAT mRNA表达,Western-blot印迹法检测松果体AANAT蛋白表达。结果:1.CHC对PCPA失眠大鼠行为学变化的影响（1）旷场活动,活动总距离、站立次数、中心区持续时间模型对照组显著高于空白对照组（P<0.05、P<0.01、P<0.01）;MT组、CHC高、中剂量组活动总距离显著低于模型对照组（P<0.05、P<0.01、P<0.05）;CHC高剂量站立次数、中心持续时间组显著低于模型对照组（P<0.01、P<0.05）。（2）高架十字迷宫,开臂次数及时间比例模型对照组显著低于空白对照组（P<0.05）;MT组、CHC高、中剂量组开臂次数百分比显著高于模型对照组（P<0.05）。（3）戊巴比妥钠协同睡眠,入睡潜伏期模型对照组显著高于空白对照组（P<0.01）;MT组及CHC高、中剂量组显著低于模型对照组（P<0.01）、睡眠时间显著高于模型对照组（P<0.01）,CHC低剂量睡眠时间显著高于模型对照组（P<0.05）。（4）给药后体重变化,模型对照组显著低于空白对照组（P<0.01）,CHC高、CHC中剂量组显著高于模型对照组（P<0.01、P<0.05）,给药各组的体重均数介于PCPA模型与空白对照组之间。2.CHC对PCPA失眠大鼠松果体病理组织学及细胞凋亡影响（1）松果体组织病理学变化模型对照组较空白对照组松果体细胞排列紊乱,核固缩,数目明显减少,空泡变性增多;CHC高、中剂量、MT组松果体细胞排列轻度紊乱,核固缩,数目减少,空泡变性少。（2）松果体组织TUNELAI指数模型对照组显著高于空白对照组（P<0.01）,MT、CHC高、中剂量组显著低于模型对照组（P<0.01）。（3）松果体细胞早期凋亡率模型对照组显著高于空白对照组（P<0.05）,CHC高剂量组显著低于模型对照组（P<0.05）。（4）松果体凋亡因子Bcl-2、Bax相对量,Bcl-2蛋白表达模型对照组显著低于空白对照组（P<0.05）,MT、CHC高、中剂量组显著高于模型对照组（P<0.01、P<0.05、P<0.05）;Bax蛋白表达模型对照组显著高于空白对照组（P<0.01）,MT、CHC高、中剂量组显著低于模型对照组（P<0.05、P<0.01、P<0.01）。3.CHC对松果体褪黑素合成关键酶AANAT的影响（1）大鼠血清MT:模型对照组显著低于空白对照组（P<0.01）;MT、CHC高、中剂量组显著高于模型对照组（P<0.05、P<0.01、P<0.05）。（2）AANAT mRNA表达:模型对照组显著低于空白对照组（P<0.01）;MT组、CHC高剂量组显著高于模型对照组（P<0.05、P<0.01）。（3）AANAT蛋白相对表达量:模型对照组显著低于空白对照组（P<0.01）;MT组、CHC高剂量组显著高于模型对照组（P<0.01）。结论:1.CHC明显减少PCPA失眠大鼠自主活动,增加进入高架十字迷宫的开臂时间百分比,缓解失眠大鼠烦躁焦虑状态,缩短入眠潜伏期、延长睡眠持续时间。2.CHC明显减轻PCPA失眠大鼠松果体组织病理损伤、抑制松果体细胞凋亡,提高PCPA大鼠血清MT水平。3.CHC改善PCPA失眠大鼠行为学、松果体结构功能,与抑制凋亡因子Bcl-2表达增加、促凋亡因子Bax表达降低,增加褪黑素合成限速酶AANAT mRNA及AANAT蛋白表达有关。
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