【摘 要】
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研究目的:观察离心力竭运动、钝挫伤对大鼠骨骼肌细胞自噬相关因子Beclin1、LC3,线粒体自噬相关因子PINK1在损伤后即刻、24h、48h不同时相的变化,探讨不同损伤方式过程中相关自噬因子的变化趋势与自噬水平的变化。研究方法:将雄性8周龄SD大鼠作为研究对象,共分为7个实验组,分别为安静对照组(C组)、离心力竭运动即刻组(E0组)、离心力竭运动24h组(E24组)、离心力竭运动48h组(E48
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研究目的:观察离心力竭运动、钝挫伤对大鼠骨骼肌细胞自噬相关因子Beclin1、LC3,线粒体自噬相关因子PINK1在损伤后即刻、24h、48h不同时相的变化,探讨不同损伤方式过程中相关自噬因子的变化趋势与自噬水平的变化。研究方法:将雄性8周龄SD大鼠作为研究对象,共分为7个实验组,分别为安静对照组(C组)、离心力竭运动即刻组(E0组)、离心力竭运动24h组(E24组)、离心力竭运动48h组(E48组)、钝挫伤即刻组(DO组)、钝挫伤24h组(D24组)、钝挫伤48h组(D48组),每组各6只。安静对照组取材:将大鼠腹腔注射麻醉后宰杀,取后肢双侧股四头肌,分为两份,一份待测实时荧光定量PCR,一份待测免疫印迹试验Western Blot。力竭运动组和钝挫伤组取材相似:SD大鼠分别在损伤后即刻、24h、48h进行同样取材。研究结果:(1)Beclin1的RT-PCR实验结果:与C组相比E0组Beclin1 mRNA含量显著减少(P<0.05),E24、E48组BeclinlmRNA含量没有显著变化;另一方面,与C组相比DO组Beclin1 mRNA含量显著升高(P<0.01),D24组、D48组Beclin1 mRNA含量显著降低(P<0.05);(2)PINK1的RT-PCR实验结果:与C组相比,E0组PINK1 mRNA含量显著降低(P<0.05),E24组变化不显著,E48组PINK1 mRNA含量显著升高(P<0.05);另一方面,与C组相比,D0组具有显著性差异(P<0.01),且骨骼肌线粒体PINK mRNA1含量显著升高,D0组、D24组骨骼肌线粒体PINK1 mRNA含量显著升高(P<0.05),D48组骨骼肌线粒体PINK1 mRNA含量无显著性差异。(3)LC3的RT-PCR实验结果:与C组相比,E0组LC3mRNA含量显著降低(P<0.05),E24组骨骼肌细胞中LC3 mRNA含量没有显著变化,E48组骨骼肌细胞中LC3 mRNA含量显著升高(P<0.01);与C组相比,D0组骨骼肌细胞中LC3 mRNA含量显著升高(P<0.01),D24组骨骼肌细胞中LC3 mRNA含量无显著性变化、D48组骨骼肌细胞中LC3 mRNA含量显著降低(P<0.01);另一方面,D0组骨骼肌细胞中LC3 mRNA含量显著高于E0组(P<0.01);与E24组相比,D24组骨骼肌细胞中LC3 mRNA含量无显著性差异,D48组骨骼肌细胞中LC3 mRNA含量则显著低于E48组(P<0.05)。(4)LC3的Western blot实验结果:与C组相比,力竭运动损伤及钝挫伤各组大鼠骨骼肌LC3蛋白含量均显著升高(P<0.05)(P<0.01)。E24组大鼠骨骼肌LC3蛋白含量相较于E0组变化不明显;E48组时,自噬水平达到最高值,即力竭运动模型中自噬水平为逐渐升高的趋势;另一方面,与D0组相比,D24组骨骼肌LC3蛋白含量升高明显(P<0.01),而相较于D24组,D48组又呈现出降低的趋势,即在钝挫伤模型中,自噬水平升高较快,在24h达到峰值,在24h之后又逐渐降低。研究结论:(1)与C组相比,力竭运动即刻组(E0)Beclin1 mRNA、PINK1 mRNA、LC3mRNA含量均显著降低,提示力竭运动恢复早期,细胞自噬水平不高;但力竭后48小时组(E48)骨骼肌细胞中PINK1 mRNA、LC3 mRNA含量及LC3蛋白水平均显著升高,提示细胞自噬在恢复期有增强趋势。(2)另一方面,与C组相比,钝挫伤即刻组(DO)Beclin1 mRNA、PINK1 mRNA、LC3 mRNA含量均显著升高,表明钝挫伤后即刻及恢复早期,细胞自噬水平明显增高,随后有下降趋势,这可能是由于钝挫伤与力竭运动模型不同,钝挫伤比力竭运动损伤更严重,所以其自噬启动较快,而与力竭运动损伤相比,钝挫伤在各个变化时相自噬相关因子表达也存在差异。
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