拟除虫菊酯类农药的免疫和色谱分析方法研究

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拟除虫菊酯类农药是一类仿生杀虫剂,具有性质稳定,无特殊臭味及安全系数高,使用浓度低等众多优点,被广泛应用于农业、工业以及家具害虫的防治中。越来越多的动物实验表明:拟除虫菊酯可能会影响神经系统的发展,会诱发癌症,抑制免疫系统,还可能干扰内分泌系统。因此,拟除虫菊酯类农药在农作物、食品以及环境中的残留分析具有重要的意义。本论文以拟除虫菊酯类农药作为研究对象,研究该类农药的的免疫分析方法和化学仪器分析方法。本文综述了拟除虫菊酯类农药的检测分析方法的研究进展,从样品的前处理方法、化学仪器分析方法及免疫分析方法的三个方面进行总结;综述了免疫分析方法的性能特点及其在生物、药品、食品和环境等复杂样品中的检测应用;在此基础上确定了本论文的选题。实验部分参考Sally K. Mak等的方法,合成溴氰菊酯的半抗原及全抗原。利用全抗原免疫动物,并采用杂交瘤技术获得PRD的单克隆抗体。通过间接ELISA法、SDS-PAGE电泳法对纯化后的抗体的特异性进行考察。结果表明,抗体属于1gG1型;SDS-PAGE确定分子量为168 kDa;PRD的抗体与固定化抗原的亲和常数为4.75×108 L/mol;抗体的特异性良好。以获得的抗体为基础采用间接竞争ELISA法对拟除虫菊酯进行检测分析。优化反应条件,得到一条检测拟除虫菊酯类农药的工作曲线。选用超市购买的铁观音茶叶作为实验检测样品,用间接竞争ELISA方法测得加标回收率。确定了间接竞争ELISA方法在37℃下反应1.5 hr,溶液环境为pH7.6的PBS溶液为最佳反应条件。间接竞争ELISA方法测定PRD的最低检测限为89 pg/mL,回收率均在90%以上。研究将生物素-亲和素放大体系应用到ELISA当中,建立更为灵敏的拟除虫菊酯类农药分析测定方法。生物素-亲和素放大体系测定PRD的最低检测限为5 pg/mL。选用固相萃取法(SPE)对茶叶样品做前处理,与HPLC构建PRD-SPE-HPLC离线分析体系,对茶叶中的四种拟除虫菊酯类农药(和一种异构体)进行检测。对PRD-SPE-HPLC系统的分析使用条件进行了优化考察,最终选定甲醇为洗脱溶剂,70%乙腈水溶液为分析溶剂。采用PRD-SPE-HPLC系统检测茶叶中农药的加标回收率,四种农药的回收率稳定达到80%以上,一种农药异构体的回收率达到72.9%。从样品处理、结果灵敏度等方面将PRD-SPE-HPLC多目标分析系统与ELISA方法进行讨论。实验发现免疫分析方法具有高灵敏度,简便,快捷的特点,在拟除虫菊酯类农残的检测中很有优势。生物技术与化学方法相结合将是分析检测工作的趋势。
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