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新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)病是近几年新出现的一种鸭的传染病,典型特征为肝脏出血和脾脏坏死。该病无明显季节性,各品种鸭均能感染,可通过引起垂直传播和水平传播。自然条件下,该病引起的死亡率通常较低,并发感染时的发病率和死亡率升高,还可引起免疫抑制和生长发育障碍。由于尚无可以使用的疫苗进行预防,新型鸭呼肠孤病毒病现已成为危害水禽养殖的重要传染病之一。因此,开发有效的疫苗和可靠的诊断方法对新型鸭呼肠孤病毒病的防控至关重要。本研究从临床发病鸭组织病料中分离鉴定获得一株NDRV(SY株),并对SY株的细胞培养特性进行研究,制备出抗NDRV p18蛋白的单克隆抗体,为NDRV致病机制、疫苗及诊断试剂的研究奠定了基础。本文内容包括以下两部分:1.新型鸭呼肠孤病毒分离鉴定及培养特性研究以肝脏出血和脾坏死为特征的发病鸭肝和脾组织接种SPF鸡胚进行病毒分离,结果鸡胚在接种后96～120 h内全部死亡,成功从鸡胚尿囊液中分离到一株病毒。通过RCR和RT-PCR对分离毒进行常见鸭病毒性传染病的病原检测,除新型鸭呼肠孤病毒检测为阳性外,其余检测结果均为阴性。将收获的尿囊液接种3日龄麻鸭,可以复制出与自然感染病例相似的症状与病理变化。上述试验结果表明该分离病毒为新型鸭呼肠孤病毒,并命名为NDRV SY株。为进一步了解该分离毒株的生物学特性,对SY株进行血凝性试验和有机溶剂敏感试验,明确该病毒不凝集鸡血红细胞,无囊膜。通过电镜观察发现该病毒粒子为直径约70 nm的球形。本研究参考NDRV 091株S1基因的序列设计一对引物,通过对分离病毒S1基因测序和系统进化树分析,表明该分离毒与NDRV亲缘关系最近,同源性高达95.2%～97.6%。将NDRV SY株在Vero细胞进行传代培养,结果表明其在Vero细胞上增殖良好,并产生明显细胞病变,为NDRV的疫苗和致病机制研究奠定了基础。2.p18单克隆抗体的制备用纯化的NDRV(SY株)免疫8周龄BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞系融合。通过间接ELISA方法筛选阳性克隆株,获得1株可分泌抗NDRV p18蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为1D3,诱生腹水的抗体效价为10~6。间接免疫荧光试验证明,1D3与NDRV发生特异性反应;免疫印迹(Western blot)分析,1D3能与p18蛋白产生特异性蛋白条带,表明筛选的单抗特异性和反应原性较好。