藏药“俄色”不同药用部位化学成分与HPLC指纹图谱及抗高血压、高血脂活性评价研究

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“俄色”原植物来源于蔷薇科苹果属变叶海棠Malus toringoides(Rehd.)Hughes.和花叶海棠Malus transitoria(Batal.)Schneid.,其干燥成熟果实称为“俄色果”(藏名瓦多),干燥叶及叶芽称为“俄色叶”(藏名(?),直译为俄色洛玛)。俄色果在《新修晶珠本草》、《中华藏本草》和《藏汉大辞典》中均有记载,具有“健胃、降血压,治肝病、高血压、腹泻、眼病、月经不调”等作用。俄色叶最早记载于《晶镜本草》,现收载于《四川省藏药材标准(2014年版)》,具有除腻涤滞、攻坚化积、保肝利胆等功效。俄色叶的主要化学成分为根皮苷、根皮素,具有良好的药理作用。俄色果与俄色叶在藏区的使用历史悠久,但其现代研究尚浅。本文对俄色果、俄色叶的理化指标、HPLC指纹图谱、抗高血压和高血脂有效部位进行了研究。主要研究结果如下:1.俄色果、俄色叶的成分分析本文在前期俄色叶芽研究基础上,针对俄色果、俄色叶的水分、灰分、多糖、总黄酮、鞣质、总酸、蛋白质、淀粉等理化指标进行了初步探索。结果表明:不同部位中多糖、总酸含量为果>叶;总黄酮、鞣质、蛋白质、淀粉含量为叶>果。俄色果和俄色叶多糖的平均含量分别为7.94%、1.46%;总酸的平均含量分别为5.09%、3.31%;总黄酮的平均含量分别为0.57%、26.39%;鞣质的平均含量分别为0.42%、7.37%;蛋白质的平均含量分别为4.53%、12.10%;淀粉的平均含量分别为15.47%、23.32%。其中俄色果多糖含量为叶的4~6倍,总酸为叶的近2倍;俄色叶总黄酮含量为果的40~50倍,鞣质含量为果的15~20倍。利用高效液相、质谱、核磁共振等技术,首次从俄色果中分离鉴定得到枸杞酸,该化合物为首次在蔷薇科植物中分离得到。此外,还从俄色果中发现了苹果酸和富马酸。2.俄色果、俄色叶HPLC指纹图谱建立本研究首次建立了俄色果HPLC指纹图谱及俄色叶HPLC指纹图谱,确定了11个共有峰构成的俄色果指纹图谱,通过与对照品色谱峰进行比对分析,指认了其中6个色谱峰:1号峰为绿原酸,3号峰为金丝桃苷,4号峰为异槲皮苷,9号峰为槲皮苷,10号峰为根皮苷,11号峰为槲皮素,其中绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮苷为首次从俄色果中发现;确定了17个共有峰构成的俄色叶指纹图谱,通过与对照品色谱峰进行比对分析,指认了其中7个色谱峰:5号峰为绿原酸,8号峰为金丝桃苷,9号峰为异槲皮苷,11号峰为槲皮苷,12号峰为根皮苷,13号峰为槲皮素,14号峰为根皮素,其中绿原酸为首次从俄色叶中发现。所建立的指纹图谱具有较好的精密度、稳定性、重复性和耐用性,可为俄色果和俄色叶的质量控制及评价提供科学依据。3.俄色果、俄色叶对大鼠离体胸主动脉血管环张力的影响首次研究俄色果和俄色叶不同提取部位(总提取部位、水提取部位、正丁醇提取部位、乙酸乙酯提取部位、二氯甲烷提取部位、石油醚提取部位)对大鼠离体胸主动脉血管环张力的影响。结果显示,俄色果及叶不同提取部位和根皮苷对基础状态的血管环均无显著影响,根皮素对基础状态的血管环具有收缩作用;对氯化钾预收缩的血管环均有不同程度的舒张作用。叶和果各提取部位中以俄色叶正丁醇部位、乙酸乙酯部位、二氯甲烷部位舒张作用较强,尤以俄色叶正丁醇部位最强;俄色叶的降压作用明显强于俄色果,其有效成分根皮素降压作用明显强于根皮苷。其降压机制之一可能为抑制电压依赖性钙通道的开放,减少细胞外钙内流,使细胞内Ca2+浓度下降而舒张血管。4.俄色果、俄色叶对医用脂肪乳诱导的肝L-02细胞的降脂活性研究首次研究俄色果和俄色叶不同提取部位(总提取部位、水提取部位、正丁醇提取部位、乙酸乙酯提取部位、二氯甲烷提取部位、石油醚提取部位)对医用脂肪乳诱导的肝L-02细胞的降脂活性。实验结果表明,俄色果不同提取部位均能不同程度降低TG和TC(P<0.05,P<0.01),其中以二氯甲烷部位和石油醚部位的降脂活性较为明显。俄色叶不同提取部位均能显著降低TC(P<0.05,P<0.01),其中以乙酸乙酯部位降低TC最明显;均不能显著降低TG;其有效成分根皮苷能降低TG,不能降低TC,根皮素能降低TC,不能降低TG。综上所述,本研究从化学成分、HPLC指纹图谱、抗高血压和高血脂药理作用等方面,对藏药“俄色”不同药用部位果和叶进行了分析研究。结果表明:俄色果和叶含有丰富的多糖、黄酮、鞣质、总酸、蛋白质、淀粉等成分;对氯化钾预收缩的血管环具有不同程度的舒张作用,对医用脂肪乳诱导的肝L-02细胞表现出良好的降脂活性。本实验将俄色叶结合其代表成分根皮苷、根皮素,从抗高血压和高血脂物质基础进行探讨。除根皮素表现出对血压具有双向调节作用外,根皮苷、根皮素与俄色叶的抗高血压和高血脂作用基本一致,根皮苷、根皮素很可能是俄色叶抗高血压和高血脂作用的物质基础之一。以上研究工作为藏药“俄色”不同部位的药用或食用提供了一定的科学依据,为藏区俄色资源的开发利用奠定了基础。
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