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目的探讨白头翁醇提取物对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠结肠炎的抗炎效果及其对细胞免疫的调节作用。
方法:SD雄性大鼠共28只,随机分成白头翁治疗组(n=10),模型组(n=10),正常对照组(n=8)。建立三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎模型.白头翁治疗组和模型组,大鼠,禁食24小时,不禁水.腹腔注射氯胺酮麻醉后,采用含30mg TNBS的TNBS50%乙醇溶液0.85ml.灌肠,保持肛门高位直到自然清醒,正常对照组在相同麻醉条件下,给予等量生理盐水灌肠。造模后第卜7天,白头翁治疗组大鼠用已制备白头翁醇提物按2g/kg用蒸馏水配制成1ml灌肠,每天一次,模型组和正常对照组以等量生理盐水灌肠,每天一次,观察大鼠进食、活动、便血和体重情况。于造模后第8天断颈处死大鼠,取下脾脏和整段结肠,沿肠系膜纵向剪开结肠,用已经预冷的冰生理盐水冲洗干净,观察结肠大体情况和组织学改变,并进行疾病活动指数(DAI)和组织学损伤评分,EL,ISA法测定结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。免疫组化学法分别检测结肠及脾脏组织CD4+T细胞、CD8+T细胞的表达。
结果:
1.模型组大鼠造模后第1天开始出现腹泻,多数出现肉眼血便,第2-5天腹泻最重,粪便隐血实验阳性,结肠黏膜组织学检查见结肠充血水肿,形成溃疡较大,可多发,组织损伤明显。白头翁治疗组腹泻、血便的程度明显减轻,组织损伤有明显改善。两组疾病活动指数(DAI)分别是9.90±1.10:6.90±1.20。组织学损伤评分分别是6.10±0.74:4.80±0.63。组间比较,差异均有显著意义(P<0.01)。
2.结肠组织TNF-α、IL-6水平:白头翁治疗组明显低于模型组,高于正常照组。它们分别是858.50±100.48pg/ml、1039.55±322.91pg/ml: 679.67±147.34pg/ml、495.46±84.05pg/ml和453.78±65.97pg/ml、298.74±75.48pg/ml,组间比较,差异均有显著意义(P<0.05~P<0.01)。
3.结肠组织CD4+、CD8+T细胞的表达:CD4+T细胞表达:白头翁治疗组大鼠明显低于模型组,高于正常对照组。它们分别是22.10±5.55,17.36±3.27和13.75±3.54。组间比较,差异均有显著意义(P<0.05):CD8+T细胞的表达:白头翁治疗组明显高于模型组.和正常对照组几乎相等。它们分别是8.90±2.61、11.60±2.52和11.13±2.49。组间比较,白头翁治疗组与模型组差异有显著意义(P<0.05),和正常对照组比较,差异无显著意义(P>0.05)。
4.大鼠脾脏组织CD4+T、CD8+T细胞的表达:CD4+T细胞的表达:模型组为21.10±3.27:白头翁治疗组为22.26±3.18:正常对照组为23.93±4.31。各组间比较,差异均无显著意义(P>0.05);CD8+T细胞的表达:白头翁治疗组明显高于模型组,和正常对照组几乎相等。模型组为14.11±2.97;白头翁治疗组为16.90±2.40:正常对照组为16.16±2.91。组间比较,白头翁治疗组和模型组差异有显著意义(P<0.05),和正常对照组比较,差异无显著意义(P>0.05)。
结论:白头翁醇提物对三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎具有明显的抗炎作用,其可能的作用机理是通过对CD4+T细胞和CD8+T细胞的免疫调节作用,从而促使细胞因子和炎症介质水平降低,如TNF-α、IL-6等,从而达到抗炎效果。