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目的:探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面的修复作用,并从同源性磷酸酶张力蛋白(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)及磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)通路影响慢性难愈合创面组织中基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotease 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotease 9,MMP-9)表达,为MEBT/MEBO临床推广提供可靠理论依据。方法:(1)参照付小兵教授等人的全层皮肤缺损法和沈道修教授等人的改良塑料环肉芽肿定量法的基础上进行精进改良,建立慢性难愈合创面模型。SPF级Wistar大鼠,按随机数字表法分为5个组,分别为美宝组(30只)、贝复新组(30只)、模型组(30只)、急性组(30只)、空白组(30只)。于造模后的第3、7、14d,观察各组大鼠的创面情况及愈合率,并通过HE和Masson染色观察创面组织形态学变化情况;(2)采用ELISA法检测各组大鼠慢性难愈合创面肉芽组织中TNF-α和IL-6蛋白表达变化,观察各组大鼠创面组织中炎症反应变化情况;(3)采用Western Blot法检测PTEN和p-AKT蛋白表达变化情况,观察各组大鼠创面组织受到干预后对PTEN/AKT信号通路的调控影响;(4)采用ELISA法、Western Blot法和RT-PCR法检测各组大鼠慢性难愈合创面肉芽组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达变化情况,以及MMP-2 m RNA和MMP-9 m RNA基因转录情况,观察各组大鼠创面组织受到干预后对MMP-2和MMP-9表达变化的影响。结果:(1)各组大鼠创面的疗效观察:急性组的创面愈合情况最优,且明显优于模型组;而美宝组和贝复新组创面愈合情况也优于模型组(P<0.05);HE染色及Masson染色结果:急性组、美宝组和贝复新组的形态学观察均较模型组好。(2)各组大鼠创面组织中TNF-α和IL-6蛋白表达的变化:(1)急性组、美宝组和贝复新组的标本组织匀浆中TNF-α蛋白表达呈现出先升高后降低的趋势,模型组则呈现出递增趋势;与模型组相比,造模第3天和第7天呈现出升高表达(P<0.05),而第14天呈现出降低(P<0.05);(2)美宝组、贝复新组和模型标本组织匀浆中IL-6蛋白表达呈现出先升高后降低趋势,而急性组呈现出递减趋势;与模型组相比,在造模第3天,美宝组和贝复新组表达升高(P<0.05),急性组表达降低(P<0.05);而造模第7天和第14天,急性组、美宝组和贝复新组表达降低(P<0.05);(3)各组大鼠创面组织中PTEN/AKT信号通路的变化:Western Blot法:(1)急性组、美宝组和贝复新组PTEN蛋白表达呈现出先下降后升高的趋势,而模型组表达呈现出显著的时间依赖性,即随着时间的增加而降低;在造模第3天和第7天,急性组、美宝组和贝复新组均较模型组低(P<0.05);在造模第14天,美宝组和贝复新组较模型组高(P<0.05);(2)急性组、美宝组和贝复新组p-AKT的表达呈现出先升高后降低的趋势,而模型组表达则呈现出逐渐升高趋势;在造模第3天,急性组、美宝组和贝复新组均较模型组高(P<0.05);在造模第7天,美宝组和贝复新组也较模型组高(P<0.05);而造模第14天,急性组、美宝组和贝复新组均较模型组低(P<0.05);(4)各组大鼠创面组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达及基因转录的变化:(1)ELISA法:急性组、美宝组和贝复新组的标本组织匀浆中MMP-2和MMP-9蛋白表达呈现出先升高后降低的趋势,模型组呈现出升高的趋势;与模型组相比,在造模第3天和第7天,急性组、美宝组和贝复新组MMP-2和MMP-9蛋白表达升高(P<0.05);在造模第14天,急性组、美宝组和贝复新组表达均较模型组低(P<0.05);(2)Western Blot法:急性组、美宝组和贝复新组MMP-2、MMP-9的表达呈现出先升高后降低的趋势,而模型组则呈现出逐渐升高的趋势;与模型组相比,在造模第3天和第7天,急性组、美宝组和贝复新组MMP-2和MMP-9蛋白表达升高(P<0.05);在造模第14天,急性组、美宝组和贝复新组表达均较模型组低(P<0.05);(3)RT-PCR法:急性组、美宝组和贝复新组MMP-2、MMP-9的表达均呈现出先升高后降低的趋势,而模型组则呈现出逐渐升高的趋势;与模型组相比,在造模第3天和第7天,急性组、美宝组和贝复新组MMP-2和MMP-9基因转录水平升高(P<0.05);在造模第14天,急性组、美宝组和贝复新组基因转录水平均较模型组低(P<0.05)。结论:(1)MEBT/MEBO显著缩短慢性难愈合创面愈合时间,提高创面的愈合率,有效改善创面组织形态学变化,促进慢性难愈合创面组织修复;(2)MEBT/MEBO可以通过下调慢性难愈合创面中TNF-α和IL-6的蛋白表达,抑制创面炎性细胞的释放,减轻创面的炎症反应;(3)MEBT/MEBO能够上调PTEN蛋白表达,进而下调p-AKT蛋白表达,调控慢性难愈合创面中PTEN/AKT信号通路,促进慢性难愈合创面组织修复;(4)MEBT/MEBO能够下调MMP-2和MMP-9蛋白表达及基因转录,调节基底膜(basement membrane,BM)的稳态平衡,加速创面愈合。