【摘 要】
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绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginodsa PA）是导致外科手术或烧伤细菌感染死亡的最主要的病原细菌之一。绿脓杆菌外毒素A（PEA）是该菌的主要致病因子之一。PEA分为三个（Ⅰ～Ⅲ）功能区，Ⅰ区与易感细胞识别有关；Ⅱ区与PEA的“跨膜移位”有关；Ⅲ区具有细胞毒性作用。 为了获得高表达量重组绿脓杆菌外毒素A（PEA）受体结合区（Ⅰ区）蛋白，用以作免疫原，我们将PEA受体结合区编码
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绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginodsa PA）是导致外科手术或烧伤细菌感染死亡的最主要的病原细菌之一。绿脓杆菌外毒素A（PEA）是该菌的主要致病因子之一。PEA分为三个（Ⅰ～Ⅲ）功能区，Ⅰ区与易感细胞识别有关；Ⅱ区与PEA的“跨膜移位”有关；Ⅲ区具有细胞毒性作用。 为了获得高表达量重组绿脓杆菌外毒素A（PEA）受体结合区（Ⅰ区）蛋白，用以作免疫原，我们将PEA受体结合区编码基因从pET-20（b）+B10质粒上亚克隆到含有T7lac启动子的pET-28（c）载体中，建成了pET-28（c）+B10质粒。用该质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）、BL21（DE3）pLysS，经IPTG诱导，对菌体总蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot分析，结果表明BL21（DE3）pLyS能高效表达目的蛋白，薄层蛋白扫描计算分析，显示表达蛋白带密度积分占总蛋白量的58％。 将重组蛋白免疫原对小鼠进行3次（每次间隔14d）多点肌肉注射免疫，在最后一次免疫后，在0，7，14，21，28，35d用精制PEA对小鼠进行攻毒，结果对小鼠的保护情况为：最后一次免疫后14d小鼠对3倍LD50的PEA攻毒保护率为100％，21d保护率为50％，28d后无保护率；小鼠病理变化主要表现肝脏与肾脏的细胞变性坏死等。 将表达的重组蛋白纯化后，与完全弗氏佐剂制成免疫原，对家兔进行3次（每次间隔14d）多点肌肉注射免疫，通过ELISA法测定，该重组蛋白能够诱导家兔产生抗PEA抗体，免疫后7～14d达到峰值，21d后逐渐降低，28～35d后降至免疫前水平。将免疫原对山羊进行免疫，通过ELISA法监测抗体效价，免疫8次后获得了终点滴度为1∶3200的山羊抗PEA抗血清，从而初步制备了抗PEA抗血清。
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