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生长激素释放肽(Ghrelin)是生长激素促分泌素受体的内源性配体,具有调控生长激素分泌,促进摄食和胃肠运动,调节能量平衡等多种生理功能。Ghrelin主要通过其功能性受体(Growth Hormone Secretagogue Receptor 1a,GHS-R1a)发挥各种生物学功能,而Ghrelin N-末端第3位丝氨酸残基酰基化是其结合受体和发挥生物学作用必须的,其酰基化主要由Ghrelin O-酰基转移酶(Ghrelin O-acetyltransferase,GOAT)特异性催化实现。本研究以新疆细毛羊为研究对象,通过检测Ghrelin系统(Ghrelin、GHS-R1a和GOAT)在反刍动物体内的表达和定位,以及Ghrelin对冷暴露羔羊生理生化指标的影响,以期为探究Ghrelin系统在调节反刍动物生物学功能等方面研究提供参考。1.用Real-time PCR方法检测了新疆细毛羊下丘脑、垂体、瘤胃、皱胃底、皱胃窦、十二指肠、空肠、回肠、心、肝、脾、肾、胰腺和睾丸等样本中Ghrelin、GHS-R1a和GOAT mRNA的表达量。Ghrelin系统mRNA在羔羊各组织中均有表达,但Ghrelin和GOAT mRNA在皱胃底表达量最高,而GHS-R mRNA在下丘脑和垂体表达量高。2.用蛋白印迹方法检测了新疆细毛羊以上已经检测mRNA表达水平的组织中蛋白水平。结果显示,Ghrelin、GHS-R1a和GOAT蛋白在羔羊上述组织中均有阳性表达,但Ghrelin和GOAT蛋白在皱胃底表达水平最高,而GHS-R1a蛋白在垂体表达量高。同时,用免疫组织化学方法检测了Ghrelin系统在新疆细毛羊皱胃底的定位。结果显示,Ghrelin免疫阳性细胞主要分布在胃粘膜层,尤其是靠近胃底腺底部区域分布的密度较高,可见圆形或椭圆形的闭锁型阳性细胞存在;GHS-R1a和GOAT蛋白在皱胃底中均有阳性区域。3.通过对羔羊进行急性冷暴露(气温-24.7℃±0.2℃,持续2 h)和颈静脉注射外源性Ghrelin(10μg/kg体重)结果显示,在禁食后8 h、16 h和24 h羔羊呼吸频率、心率和血糖浓度均较禁食前显著降低(P<0.05),在禁食后16 h和24 h直肠温度均较禁食前极显著降低(P<0.01),而血液生理指标变化不明显(P>0.05);在冷冻1.5 h和2.0 h后羔羊呼吸频率较保温组显著减慢(P<0.05),心率和血糖浓度在冷冻后1.0 h、1.5 h和2.0 h显著增加(P<0.05),冷冻过程中羔羊直肠温度差异不明显(P>0.05);冷冻2 h后颈静脉一次性注射Ghrelin未发现对羔羊以上指标的影响(P>0.05)。本研究结果提示反刍动物Ghrelin主要在皱胃合成,通过下丘脑和垂体调控动物生长发育是其主要生物学作用;羔羊在禁食和低温情况下可通过调整自身活动,以维持机体稳态,并且Ghrelin可能并未直接参与该调控过程。