【摘 要】
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目的环氧化酶是花生四烯酸转化为前列腺素的一个重要限速酶。大量研究结果显示，COX-2在炎症及肿瘤部位均高表达，COX-2及其代谢产物PGE2在炎症和肿瘤的发生发展过程中起重要作用
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目的环氧化酶是花生四烯酸转化为前列腺素的一个重要限速酶。大量研究结果显示，COX-2在炎症及肿瘤部位均高表达，COX-2及其代谢产物PGE2在炎症和肿瘤的发生发展过程中起重要作用。本研究拟利用长片段双链RNA(dsRNAs)在体外经Dicer酶消化获得小RNA(D-siRNAs)抑制人肺上皮细胞A549COX-2的表达并降低PGE2的分泌，以望获得治疗气道炎症和肿瘤的一种新思路。
方法(1)IL-1β5ng/ml干预A549细胞0，3，6，9，12小时,Westernblot法观察IL-1β诱导A549细胞COX-2蛋白表达的时间依赖性。
(2)用Trizol法抽提IL-1β刺激的体外培养的A549细胞总RNA,RT-PCR扩增COX-2基因。
(3)设计两端带T7promoter,SP6promoter的COX-2cDNA的PCR引物，通过PCR方法，获得两端带T7及SP6promoter的COX-2DNA。
(4)用RiboMAXLargeScaleRNAProductionSystems-SP6andT7试剂盒体外将COX-2DNA转录为RNA。
(5)长片段RNA经Dicer酶消化为小RNA,纯化并获取小RNA(d-siRNAs)。
(6)用TransMessengerTransfectionReagent将d-siRNAs转染人肺上皮细胞A549.
(7)COX-2mRNA表达用RT-PCR检测，细胞培养上清液中PGE2含量用ELISA测定。
结果(1)IL-1β可刺激A549细胞COX-2蛋白质的表达，干预9小时后COX-2表达达到高峰。
(2)在体外，长片段dsRNAs经Dicer酶消化可成功获得d-siRNAs。
(3)D-siRNAs可有效抑制A549细胞COX-2的表达并降低PGE2的分泌。
结论D-siRNAs可有效抑制A549细胞COX-2的表达.
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