论文部分内容阅读
本实验以平贝母为供试材料,筛选出最优外植体和培养基质,建立了平贝母的高效再生体系,探讨了激素自养型培养物生理生化指标与形态发生的关系,还探讨了不同离体保存方法与细胞存活率和长势的关系,并进行了细胞形态学观察,确定了细胞分化的类型,为进一步研究形态发生控制和工厂化生产鳞茎奠定了基础。 平贝母鳞茎和茎段诱导不定芽丛的最佳基质为MS+NAA0.5mg/L+BA1.5mg/L,二者诱导愈伤组织的最佳基质分别为MS+2.4-D2.0mg/L和MS+2.4-D1.5mg/L,pH=6.0,光培养。对休眠鳞茎进行GA500mg/L的处理可打破休眠,再生植株的周期为40-50天。将平贝母培养物先减半原激素浓度,再以无激素MS基本基质继代培养10余月,可获得激素自养型培养物。器官发生过程中从愈伤组织到不定芽再到再生植株,游离氨基酸的含量先升高再下降,而可溶性糖含量是先下降再升高,其中不定芽丛中游离氨基酸含量最高为10.90%,愈伤组织中可溶性总糖的含量最高为6.49%;不定芽丛中的淀粉酶活力较高,并且几种培养物中以α-淀粉酶变化趋势与总淀粉酶变化趋势相似,其变化幅度也高于β-淀粉酶;过氧化物同工酶以不定芽的酶带带数最多,这说明不定芽中酶的种类最多,含量也较高。在培养物发育时期各种酶的活性和功能均不相同,可见发育是一个复杂的各种功能元件相互协调配合的过程。 平贝母培养物有着和生药相同的生物碱斑点。其中不定根中的总生物碱含量高于愈伤组织和不定芽丛。 通过超低温的方法可以达到中长期保存平贝母种质资源的目的。保存程序为:加入5%DMSO+5%甘油冷冻保护剂→-20℃停留2h→超低温冰箱保存→38℃水浴迅速解冻→MS培养基冲洗→接于新鲜培养基再培养。另外本实验中加入甘露醇、PP333也成功保存了平贝母培养物。