蝗绿僵菌转录因子MapacC的功能研究

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昆虫病原真菌作为重要的生防资源,潜力巨大。昆虫病原真菌孢子的产量和质量、逆境耐受性以及毒力是衡量杀虫真菌农药防效的重要指标。已有研究表明,C2H2型转录因子pacC/Rim101在真菌适应碱性pH环境生长、产孢以及侵染致病过程中起重要作用,且在不同真菌中其功能存在差异。目前pacC在模式昆虫病原真菌蝗绿僵菌中的功能还未见报道,本研究采用敲除和回复策略明确了转录因子MapacC的功能。研究发现,与其他真菌中的pacC相似,蝗绿僵菌中的pacC蛋白含有3个C2H2型锌指结构,在蝗绿僵菌适应碱性环境生长过程中起重要作用。表达特征分析结果表明,MapacC在蝗绿僵菌侵入昆虫体内初期的表达量最高,推测该基因可能在蝗绿僵菌适应昆虫体内环境或躲避寄主免疫反应过程中起重要作用。敲除MapacC后蝗绿僵菌产孢量降低,抗紫外能力不变,但一些抵御热休克的基因表达量显著升高导致蝗绿僵菌的耐热性增加。荧光染色分析发现,MapacC缺失后蝗绿僵菌分生孢子表面的结构发生了变化。敲除MapacC后蝗绿僵菌的毒力显著降低。侵染过程分析发现,MapacC缺失后对蝗绿僵菌附着胞的形成影响轻微,但在蝗虫体内增殖速率显著降低,与受到野生型菌株侵染的蝗虫相比,接种了ΔMapacC菌株孢子的蝗虫血液中酚氧化物(PO)酶活显著升高,体壁上结节数量显著增多,说明MapacC可能在蝗绿僵菌躲避蝗虫的免疫识别过程中起重要作用。值得注意的是,敲除MapacC后蝗绿僵菌无法进行微循环产孢,RNA-seq分析共筛选得到差异表达基因44个,其中27个基因在MapacC缺失后上调表达,17个基因下调表达,根据有注释信息的34个基因分析发现,MapacC可能通过调控细胞分裂和菌丝生长等过程中起重要作用的蛋白影响蝗绿僵菌的产孢模式转换。综上所述,本研究明确了MapacC在蝗绿僵菌中的作用,发现该基因对蝗绿僵菌的生防潜能具有重要贡献。本研究结果将为进一步阐明昆虫病原真菌的侵染致病机制和丝状真菌产孢模式转换机制提供理论依据,有望为昆虫病原真菌的分子改良提供新的候选基因,具有重要的理论意义和实际应用价值。
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