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半乳糖凝集素3(Galectin-3)是Galectin家族的重要成员之一,其分子量为30～35 kD,是唯一的嵌合型半乳糖凝集素。最新研究成果指出,Galectin-3作为一种肿瘤相关蛋白,与细胞表面分子和细胞外基质作用,参与细胞黏附、增殖、凋亡、血管形成及mRNA剪切等活动,与肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移等恶性生物学行为密切相关。果胶是一类富含半乳糖醛酸的酸性杂多糖,在抗肿瘤,增强免疫力方面有独特的效果。研究表明,果胶能够通过与Galectin-3的作用,进而抑制癌细胞聚集和转移,发挥抗肿瘤的作用。本文构建了Galectin-3的表达质粒,优化了Galectin-3蛋白提取纯化的方法,建立了Galectin-3相关活性实验方法,研究了果胶对Galectin-3与T细胞相互作用的影响。具体内容如下：成功构建Galectin-3表达质粒：利用克隆质粒pOTB7-Gal-3,经过PCR,获得Galectin-3的编码cDNA,构建带有Galectin-3基因序列的表达质粒pET-22b(+)-Gal-3。经琼脂糖电泳检测,表达质粒含有Galectin-3基因片段,测序结果表明基因片段是Galectin-3基因。优化Galectin-3蛋白表达条件：采用经典的大肠杆菌表达蛋白的方法,优化蛋白表达温度和IPTG浓度两个影响因素,分别进行三个温度和四个IPTG浓度的诱导实验,SDS-PAGE蛋白电泳检测蛋白表达量。结果显示诱导温度25℃,IPTG浓度218.5μM为蛋白最佳诱导表达条件。提取纯化Galectin-3蛋白：利用Galectin-3与asialofetuin结合的原理,将处理过的Fetuin(即asialofetuin)连接到Sepharose 4B凝胶上,制备亲和层析柱asialofetuin-sepharose 4B。利用优化的条件大量表达Galectin-3蛋白,经亲和层析柱纯化,得到纯化的Galectin-3蛋白。建立Galectin-3相关活性实验方法：建立Galectin-3结合T细胞表面实验方法、Galectin-3诱导T细胞凝集实验方法、Galectin-3诱导T细胞凋亡实验方法。检测果胶对Galectin-3活性的影响：应用上述活性实验方法,检测果胶类多糖Galactan、RGI-4、MCP对Galectin-3与T细胞相互作用的影响。结果显示,Galactan对Galectin-3结合T细胞表面以及Galectin-3诱导的T细胞凝集和凋亡没有明显的抑制作用；MCP对Galectin-3结合T细胞表面以及Galectin-3诱导的T细胞凝集和凋亡有一定的抑制作用；RGI-4明显抑制Galectin-3结合T细胞表面,对Galectin-3诱导的T细胞凋亡抑制有一定的作用,但对Galectin-3诱导的T细胞凝集抑制作用不明显。