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奶牛乳房炎是由各种病因引起的乳房炎症,它造成的经济损失非常巨大。尽管各国兽医工作者多年来对该病的预防与治疗研究付出了极大的努力,但仍无满意的结果,至今仍以抗生素治疗为主。由于抗生素残留和耐药菌株的出现造成奶品质下降和治疗困难,所以迫切需要研究新的预防与治疗方法。病原学调查表明,无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌是奶牛乳房炎的常见病原菌,但有关疫苗却少见报道且效果不理想,部分原因是因为链球菌血清型多缺乏共同保守性抗原。近几年,链球菌的一些保守性抗原被陆续发现,分别是停乳链球菌的MIG基因,无乳链球菌的SIP基因和无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌的GAPC基因,并认为它们可作为基因工程疫苗的候选抗原基因。本文克隆并表达了这些保守性抗原基因,为开发链球菌基因工程疫苗奠定基础。方法:本实验首先运用THB(Todd-Hewitt Broth)固体选择性培养基和色素试验培养基快速分离无乳链球菌和乳房链球菌,并结合生物梅里埃开发的VITEK全自动细菌鉴定仪进行准确鉴定。然后用PCR的方法分别从停乳链球菌、无乳链球菌和乳房链球菌的基因组DNA中扩增出MIG、SIP和各自的GAPC基因,并构建原核表达载体pET32a(+)-MIG、pET32a(+)-SIP和各自的pET32a(+)-GAPC。用BL21(DE3)/pET系统表达Trix-MIG、Trix-SIP和各自的Trix-GAPC融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。结果:(1)分离鉴定到一株无乳链球菌和一株乳房链球菌。(2)PCR扩增产物经测序,证实与GenBank中MIG基因(AF354651)、和SIP基困(DQ650634)和无乳链球菌(CP000114)/停乳链球菌(AF375662)/乳房链球菌(AF421900)的GAPC基因序列同源性都在99%左右。SDS-PAGE显示,MIG、SIP和GAPC融合蛋白分别为89kDa、71kDa和55kDa。Western blot分析显示,MIG、SIP和GAPC融合蛋白可分别与停乳链球菌、无乳链球菌和乳房链球菌的多克隆抗血清发生特异性反应。结论:成功分离到一株无乳链球菌和一株乳房链球菌并克隆和表达了停乳链球菌MIG基因、无乳链球菌SIP基因和无乳链球菌/停乳链球菌/乳房链球菌GAPC基因,为基因工程疫苗的研制奠定一定的基础。