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背景：
骨肉瘤是一种常发生于儿童和青少年的长骨干骺端恶性程度较高的骨肿瘤疾病，早期易发生转移且易复发。骨肉瘤的病因尚未明确，临床上没有可靠的、非侵入性的生物学标志物来检测疾病的发生、发展和预后。目前临床上治疗骨肉瘤的方法主要为截肢联合新辅助化疗,但这些方案治疗成本高,治疗周期长,效果不确切,五年生存率低,预后差。因此明确病因及发现有效的生物学标志物至关重要。
microRNAs(miRNAs)是一类小的非编码RNAs分子,在肿瘤的发生、发展和转移中起到关键性的作用。由于它们的保守性、稳定性以及在血浆中易于分离等特征,目前已成为血浆生物标志物开发的理想候选者,因此近年来miRNAs已成为科学家研究的热点。
miR-200家族作为miRNAs中的一员，目前被认为在人类健康和疾病中发挥着特殊的作用，其中miR-200c在多种肿瘤中呈低表达水平。据研究，miRNAs常常是在转录后，通过调控基因发挥作用。有研究表明，miRNAs可能调控AKT2基因表达。
AKT2属于丝氨酸/苏氨酸家族中的一员，在疾病的发生、发展中发挥重要作用。目前已有多项研究表明多种miRNAs在骨肉瘤中与AKT2的存在关系，然而，关于miR-200c与AKT2在骨肉瘤中的关系尚未有研究表明。本研究旨在细胞水平初步研究骨肉瘤中miR-200c与AKT2的关系。希望通过研究两者之间的关系对骨肉瘤发生机制有进一步深入的了解，为后续骨肉瘤的预防、诊断和治疗提供一种新的思路。
目的：
本研究旨在了解miR-200c在骨肉瘤细胞中的表达水平,以及miR-200c对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响,进一步研究在骨肉瘤细胞中miR-200c与AKT2的相关调控关系。
方法：
选取四种骨肉瘤细胞株(HOS、U-2OS、Saos-2、MG-63)和正常成骨细胞NHOst,利用qRT-PCR技术检测miR-200c在各组细胞株中的表达水平;构建稳定的骨肉瘤细胞株,qRT-PCR验证稳定性;CCK8法检测两组骨肉瘤细胞株的增殖能力;Matrigel和Transwell小室测定两组骨肉瘤细胞株侵袭和迁移能力;TargetScan搜索程序预测miR-200c与AKT2的结合位点,构建不同的荧光素酶基因表达质粒并检测荧光素酶活性;RT-PCR技术测定两组骨肉瘤细胞株中AKT2基因表达水平;WesternBlot技术测定两组骨肉瘤细胞株中AKT2蛋白相对含量。
结果：
1.与正常成骨细胞NHOst相比,四种骨肉瘤细胞株中miR-200c表达量均降低,具有统计学意义(P＜0.05),其中MG-63中miR-200c的表达量最低(P＜0.01);2.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中miR-200c基因表达量明显升高(P＜0.01);3.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中骨肉瘤细胞的增殖能力明显降低(P＜0.01);4.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力均明显下降(P＜0.01);5.经TargetScan预测,miR-200c可与AKT23URT区部分区域结合;6.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中野生型(WT)的荧光素酶活性明显降低(P＜0.01),而突变型(MUT)的荧光素酶活性之间无统计学差异(P＞0.05),对MG-63/miR-200c组中野生型和突变型荧光素酶活性进行比较,具有统计学意义(P＜0.05);7.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中AKT2基因表达量明显降低(P＜0.05);8.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中AKT2蛋白表达量明显下降(P＜0.05)。
结论：
miR-200c在骨肉瘤细胞中表达下调，并且其可以通过抑制AKT2的表达来抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力。
骨肉瘤是一种常发生于儿童和青少年的长骨干骺端恶性程度较高的骨肿瘤疾病，早期易发生转移且易复发。骨肉瘤的病因尚未明确，临床上没有可靠的、非侵入性的生物学标志物来检测疾病的发生、发展和预后。目前临床上治疗骨肉瘤的方法主要为截肢联合新辅助化疗,但这些方案治疗成本高,治疗周期长,效果不确切,五年生存率低,预后差。因此明确病因及发现有效的生物学标志物至关重要。
microRNAs(miRNAs)是一类小的非编码RNAs分子,在肿瘤的发生、发展和转移中起到关键性的作用。由于它们的保守性、稳定性以及在血浆中易于分离等特征,目前已成为血浆生物标志物开发的理想候选者,因此近年来miRNAs已成为科学家研究的热点。
miR-200家族作为miRNAs中的一员，目前被认为在人类健康和疾病中发挥着特殊的作用，其中miR-200c在多种肿瘤中呈低表达水平。据研究，miRNAs常常是在转录后，通过调控基因发挥作用。有研究表明，miRNAs可能调控AKT2基因表达。
AKT2属于丝氨酸/苏氨酸家族中的一员，在疾病的发生、发展中发挥重要作用。目前已有多项研究表明多种miRNAs在骨肉瘤中与AKT2的存在关系，然而，关于miR-200c与AKT2在骨肉瘤中的关系尚未有研究表明。本研究旨在细胞水平初步研究骨肉瘤中miR-200c与AKT2的关系。希望通过研究两者之间的关系对骨肉瘤发生机制有进一步深入的了解，为后续骨肉瘤的预防、诊断和治疗提供一种新的思路。
目的：
本研究旨在了解miR-200c在骨肉瘤细胞中的表达水平,以及miR-200c对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响,进一步研究在骨肉瘤细胞中miR-200c与AKT2的相关调控关系。
方法：
选取四种骨肉瘤细胞株(HOS、U-2OS、Saos-2、MG-63)和正常成骨细胞NHOst,利用qRT-PCR技术检测miR-200c在各组细胞株中的表达水平;构建稳定的骨肉瘤细胞株,qRT-PCR验证稳定性;CCK8法检测两组骨肉瘤细胞株的增殖能力;Matrigel和Transwell小室测定两组骨肉瘤细胞株侵袭和迁移能力;TargetScan搜索程序预测miR-200c与AKT2的结合位点,构建不同的荧光素酶基因表达质粒并检测荧光素酶活性;RT-PCR技术测定两组骨肉瘤细胞株中AKT2基因表达水平;WesternBlot技术测定两组骨肉瘤细胞株中AKT2蛋白相对含量。
结果：
1.与正常成骨细胞NHOst相比,四种骨肉瘤细胞株中miR-200c表达量均降低,具有统计学意义(P＜0.05),其中MG-63中miR-200c的表达量最低(P＜0.01);2.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中miR-200c基因表达量明显升高(P＜0.01);3.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中骨肉瘤细胞的增殖能力明显降低(P＜0.01);4.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力均明显下降(P＜0.01);5.经TargetScan预测,miR-200c可与AKT23URT区部分区域结合;6.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中野生型(WT)的荧光素酶活性明显降低(P＜0.01),而突变型(MUT)的荧光素酶活性之间无统计学差异(P＞0.05),对MG-63/miR-200c组中野生型和突变型荧光素酶活性进行比较,具有统计学意义(P＜0.05);7.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中AKT2基因表达量明显降低(P＜0.05);8.与MG-63/miR-NC组相比,MG-63/miR-200c组中AKT2蛋白表达量明显下降(P＜0.05)。
结论：
miR-200c在骨肉瘤细胞中表达下调，并且其可以通过抑制AKT2的表达来抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力。