【摘 要】
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紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是世界范围内被广泛栽培的优质牧草,是我国草牧业的重要组成部分。作为典型的同源四倍体植物,紫花苜蓿具有自交不亲和性的特点,难以通过传统杂交选育技术培育新品种。近年来,基因编辑技术的快速发展以及高质量紫花苜蓿基因组的破译,为培育高产优质紫花苜蓿新品种带来了前所未有的机会。本研究针对四倍体紫花苜蓿基因编辑育种需要攻克的两大关键问题—外植体组织培养再生体系和
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紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是世界范围内被广泛栽培的优质牧草,是我国草牧业的重要组成部分。作为典型的同源四倍体植物,紫花苜蓿具有自交不亲和性的特点,难以通过传统杂交选育技术培育新品种。近年来,基因编辑技术的快速发展以及高质量紫花苜蓿基因组的破译,为培育高产优质紫花苜蓿新品种带来了前所未有的机会。本研究针对四倍体紫花苜蓿基因编辑育种需要攻克的两大关键问题—外植体组织培养再生体系和基因编辑体系构建,开展了技术研究工作,主要结果如下:1.建立了适宜多个四倍体紫花苜蓿种质的植物组织培养体系。以36个不同遗传背景的紫花苜蓿材料为对象,在其中35个材料中实现了以子叶和下胚轴为外植体的愈伤组织发生,平均诱导效率30.9%;进而在其中25个材料中成功实现了完整植株再生,平均再生效率10.38%。相关性分析显示,胚性愈伤数与植株再生数量存在良好的线性关系,R~2=0.8631,认为胚性愈伤的形成是紫花苜蓿外植体分化再生的基础。2.探究了影响紫花苜蓿外植体胚性愈伤组织发生和植株再生的关键因素。不同基因型紫花苜蓿胚性愈伤组织诱导效率的聚类结果共分为3类,效率区间分别为61.6%～87.5%（占比19.4%）、32.4%～49.5%（占比27.8%）和≤26.6%（占比52.8%）,不同类别的种质材料来源无明显偏向性;在此基础上,与秋眠级的双因素聚类分析呈现4个聚类结果,特征分别为高愈伤诱导效率与低秋眠级聚合、较低愈伤诱导效率与最高休眠级聚合、中等愈伤诱导效率与中等休眠级聚合和最低愈伤诱导效率与较低秋眠级聚合,进一步的相关性分析显示胚性愈伤形成效率与秋眠级无明显关系。14个具优异性状的种质材料胚性愈伤诱导实验结果显示,子叶和下胚轴均是优良的外植体来源,但总体以下胚轴更为适宜,其中SARDI 10子叶诱导效率最高,Hunter River下胚轴诱导效率最高。此外,不同基因型材料在组织培养过程中发生褐化的程度存在显著差异,其中敖汉、Power 5020、陇东和Spyder最易发生褐变。3.在紫花苜蓿中建立了基于根癌农杆菌介导的基因编辑体系,并进一步对紫花苜蓿中调控复叶发育的关键基因PALMATE-LIKE PENTAFOLIATE 1（MsPALM1）进行了定点敲除,成功获得了mspalm1基因编辑植株。在紫花苜蓿中克隆得到了4个MsPALM1等位基因,针对MsPALM1基因特异序列设计了CRISPR/Cas9精准靶点,通过携带p MS-CRISPR/Cas9骨架载体的根癌农杆菌侵染敖汉苜蓿,成功敲除了MsPALM1基因并获得2株多叶型幼苗。基因组序列分析表明,这2株多叶型幼苗的4个等位基因均发生突变,其中1株（PA4-2）为仅含一种突变类型的纯合子。进一步的表型分析显示,这些基因编辑植株的平均叶面积增加32.8%。
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目的：探讨腹腔镜阑尾切除术中倒刺线缝合包埋阑尾残端的临床效果。方法：选取2018年1月-2021年12月揭阳市人民医院收治的60例急性根部坏疽阑尾炎患者作为研究对象，采用随机数字表法将其分为对照组和研究组，各30例。对照组采用可吸收线间断缝合包埋法，研究组采用倒刺线连续性浆肌层缝合法包埋阑尾残端。对比两组患者术中和术后相关指标及术后并发症发生率。结果：研究组患者术中出血量少于对照组，住院费用低于对
目的对比脑卒中吞咽障碍患者在首次发病后不同时间段实施早期康复措施对其吞咽功能、生活质量、呛咳情况、肺炎发生率的影响,探索首发脑卒中吞咽障碍患者开始早期康复的最佳时间段。方法选取2020.7～2022.1入住兰州市3所三级甲等医院的135例首发脑卒中吞咽障碍急性期患者,根据患者入组时的病程天数分为三组:试验A组（发病后0-3日入组）、试验B组（发病后4-7日入组）、试验C组（发病后8-14天入组）,
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目的:探讨在完全腹腔镜下远端胃癌根治术消化道重建中使用倒刺线关闭共同开口及吻合口加针的安全性及效果。方法:回顾分析郑州大学附属肿瘤医院普外科2019年10月至2021年7月由同一手术团队完成的全腹腔镜下远端胃癌根治术62例的资料。使用倒刺线关闭共同开口及吻合口、闭合线加针共32例（观察组）,使用直线切割闭合器关闭共同开口及吻合口、闭合线不加针共30例（对照组）。比较两组的一般资料和手术相关指标。结
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