青岛文昌鱼dax1基因的克隆与表达研究

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文昌鱼是脊索动物门头索动物亚门的代表动物,介于无脊椎动物和脊椎动物之间,有着独特的分类地位,在研究脊椎动物起源和进化方面具有十分重要的作用。文昌鱼的基因组没有经过大规模复制,结构相对简单,文昌鱼作为进化研究的模式生物越来越被人们所看重。dax1基因也称作nr0b1,是核受体超家族的一个重要成员。dax1基因最早是在人中发现并分离出来的,它的重复可引起剂量敏感性反转综合症,它的突变可引起先天性肾上腺发育不全。随后在瓣鳃类、鱼类、两栖类、爬行类、鸟类和其他哺乳类的一些物种中发现也有dax1基因的存在。自1774年首次文昌鱼发现以来,至今仍没有关于其dax1基因的研究报道。本论文选取青岛文昌鱼作为实验材料,从NCBI上下载与文昌鱼亲缘关系较近的物种dax1基因的序列,进行同源性比较,依据保守序列设计特异性引物。以文昌鱼RNA作为模板,反转录出一段cDNA序列,再利用RACE技术进行5’RACE和3’RACE,扩增出长度为1536bp的完整cDNA序列,它含有一个长度为876bp的开放阅读框,可以编码292个氨基酸,5’非编码区为216bp,3’非编码区为441bp。以文昌鱼基因组DNA作为模板,根据已知DNA序列片段利用染色体步移技术进行5’端步移和3’端步移,扩增了5’端和3’端侧翼部分序列,获得了长度为2644bp的DNA序列。选取长度为250bp左右的cDNA片段,用地高辛标记后作为探针,进行文昌鱼组织切片原位杂交,结果显示,dax1基因在文昌鱼的性腺和鳃中均有表达,在肌肉中几乎不表达,没有明显的雌雄差异。
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