论文部分内容阅读
绝经过渡期是一个以卵巢功能逐渐衰退为中心的动态过程。卵巢功能衰退的基本表现为卵巢储备功能降低,产生卵子能力减弱,卵泡质量下降,出现月经稀少甚至闭经等症状,导致女性生育能力下降及性激素的缺乏,严重影响女性的生命健康及生活质量。因此探寻卵巢功能衰退的内在机制,寻找延缓卵巢功能衰退的方法具有重要的临床意义。卵巢自身局部微环境对卵巢功能有重要调控作用,目前已知卵巢表达的多种基因中有许多属于转化生长因子-β(transforming growth factor beta)超家族的成员,其中TGF-β是TGF-β超家族的一个亚型,与卵巢功能密切相关,它们以自分泌或旁分泌的方式通过Smad蛋白家族表达在不同时期卵泡的卵母细胞、颗粒细胞、卵泡膜细胞,在卵泡的生长、发育、闭锁,卵细胞的发育成熟方面都有重要的作用。Smad4是TGF-β信号传导通路的中心环节,在TGF-β信号转导中的作用尤为重要。因此本课题以绝经过渡期雌性大鼠为研究对象,旨在研究在绝经过渡期卵巢功能衰退过程中TGF-β和Smad4在卵巢及其颗粒细胞中的表达变化,初步探究其与卵巢功能衰退的关系。本实验选用12月龄雌性SD大鼠40只,采用阴道涂片法筛选动物模型,将符合条件大鼠随机分为两组:绝经过渡期组(MT组)和雌激素治疗组(E2组),另选20只6月龄雌性SD大鼠,同样采用方法筛选动情周期正常大鼠,将符合条件大鼠作为空白对照组(C组)。雌激素治疗组(E2)给予雌激素治疗6周,其余两组给予空白溶剂芝麻油。各组随机分为两部分,一部分麻醉处死后取卵巢组织,行HE染色,观察卵巢形态;另一部分大鼠卵巢用于颗粒细胞的分离、培养。通过FSHR免疫细胞化学染色鉴定颗粒细胞,通过免疫组织化学、细胞化学及RT-qPCR方法检测TGF-β和Smad4在各组卵巢及颗粒细胞中的表达变化。光镜下观察卵巢组织形态可见各组卵巢中含有不同发育阶段的卵泡以及黄体和闭锁卵泡等结构。免疫组织化学结果显示TGF-β和Smad4表达于卵巢中卵泡颗粒细胞,卵母细胞及卵泡膜细胞。与C组相比,MT组、E2组卵巢中TGF-β、Smad4表达阳性率均降低(P<0.01);与MT组相比,E2组中TGF-β、Smad4表达阳性率升高(P<0.01),结果具有统计学意义。在绝经过渡期大鼠卵巢中TGF-β和Smad4经pearson相关系数检验,相关系数为0.879(P=0.000),二者蛋白水平表达具有正相关性。RT-qPCR结果显示,MT组和E2组大鼠卵巢及颗粒细胞内TGF-β和Smad4mRNA的表达均低于C组(P<0.05);且MT组大鼠卵巢及颗粒细胞内TGF-β和Smad4mRNA的表达低于雌激素E2组(P<0.05)。通过分析实验结果可以得出,TGF-β和Smad4广泛表达于卵巢及其颗粒细胞,可以调节卵巢功能。在卵巢功能衰退过程中,TGF-β和Smad4表达具有正相关性,TGF-β作为Smad4上游信号分子影响着smad4的表达水平,从而影响靶基因的表达。TGF-β及Smad4在卵巢功能衰退过程中起正向调控作用。卵巢功能衰退与TGF-β及Smad4的表达下调有关。