【目的】肾脏的再生能力几乎为零。有学者尝试用去细胞肾脏生物支架来诱导缺损肾脏的再生,已取得一定进展。但单纯去细胞生物支架有易塌陷、变形、降解快等不足之处。肾支架植入到部分肾切除大鼠体内后,支架组织降解过快,不能为组织或细胞的迁移再生提供良好的生长环境。要解决这一问题,通常需要通过交联剂来改善支架的性能,本研究拟通过京尼平交联法提高去细胞肾脏生物支架的性能,以利于组织和细胞的再生,能够为缺损肾脏的再生和修复提供更好的条件。【方法】SD大鼠90只,体重230g左右,完全随机分为正常组、未交联支架组和京尼平交联支架组。从大鼠体内结扎血管,分离肾脏,PBS经腹主动脉灌注去血后作为正常组;将离体肾脏依次灌注肝素溶液、1%TritonX-100、1%十二烷基硫酸钠(SDS)、去离子水,得到去细胞以后的肾脏生物支架,作为未交联支架组;而将制备好的去细胞生物支架浸泡在0.5%的京尼平溶液中37℃恒温箱中行化学交联12h得到京尼平交联支架组。分别用HE、Masson、免疫荧光染色观察三组肾脏的组织形态学特征;血管铸型观察三组肾脏内部脉管结构,分析支架组肾脏脉管结构的保留情况;Ⅰ型胶原酶促降解实验检测三组肾脏的抗降解能力;细胞与支架共同培养,利用CCK8、Transwell迁移、免疫荧光实验检测支架对细胞生存生长情况的影响;将大鼠左肾下1/3切除,将制备好的肾脏支架补足缺损部位,以观察交联后支架植入体内,对缺损肾脏再生能力的影响。【结果】正常大鼠肾脏去细胞过程后,得到的单纯去细胞肾脏生物支架。HE、Masson染色以及免疫组织荧光染色结果显示:生物支架已经几乎完全去除组织中的细胞核成分,保留了细胞外基质成分。经京尼平交联后的肾生物支架胶原纤维排列整齐致密,与正常组相似,可清晰看到肾小球的轮廓及肾小球部位聚集的纤维结构;从荧光结果也可以看到细胞核成分被完全去除,且Ⅰ型胶原蛋白和Ⅳ型胶原蛋白特异性荧光染色增强。肾脏血管铸型结果显示:去细胞肾脏生物支架中保留了完整的脉管结构,经京尼平交联后的支架也同样保留了与正常组肾脏相似的完整的脉管结构,并未损伤支架内的血管结构。Ⅰ型胶原酶促降解实验表明京尼平交联后的去细胞肾脏生物支架的抗降解能力明显提升。血管内皮细胞与各组肾脏支架共培养实验结果显示:各组肾脏支架均有细胞黏附生长,CCK8结果显示经京尼平交联后,肾支架对血管内皮细胞并无细胞毒性,而且有良好的细胞相容性,能在一定程度上促进细胞的增殖。生物支架体内植入实验结果显示:京尼平交联去细胞肾脏支架后,可见未经交联的去细胞支架很快降解,组织模糊不清,而京尼平交联后的肾脏支架补足缺损部位以后,可明显观察到有细胞移入支架,且肾小球结构清晰可见。【结论】以京尼平交联大鼠肾支架补足大鼠体内的肾脏缺损部位,能够增强支架诱导的肾脏再生和修复能力。