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乳铁蛋白是一个广泛存在于哺乳动物外分泌液中的多功能糖蛋白.它的许多生物学功能都与其N-叶密切相关.本研究从泌乳15天的约克夏母猪乳腺组织中克隆了猪乳铁蛋白N-叶(PLF-N)基因,用大肠杆菌表达系统和毕赤嗜甲醇酵母表达系统表达了重组猪乳铁蛋白N-叶(rPLF-N),并研究了表达产物的抑菌效果.主要研究结果如下:摘取泌乳15天的约克夏母猪乳腺组织并从中提取总RNA,经RT-PCR扩增,得到了猪乳铁蛋白N-叶的基因,此基因包含一个1038bp的PLF-N的编码序列.猪乳铁蛋白基因1039-1041bp处为agg密码子,在设计引物时突变为taa终止密码子.因此,此开放读框翻译后的蛋白包含346个氨基酸残基,其中包括17个氨基酸残基的信号肽.将此基因克隆入pGEM-3Z载体并测序后与设计引物时参考的Genebank网站登录序列(L77887)比对,发现本研究中所克隆的PLF-N基因序列与L77887的同源性高达99﹪.将此基因克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a(+)并转化大肠杆菌BL21DE3,用IPTG诱导表达.表达产物的SDS-PAGE和Western Blot分析结果表明,PLF-N基因在大肠杆菌中得到了表达,重组表达产物未被糖基化,其分子量约42kDa左右.根据酵母表达载体的特征重新设计引物,以pGEM-PLF-N为模板通过PCR扩增PLF-N基因,将此基因克隆入酵母表达载体pMET-B.DNA测序结果表明重组表达载体pMET-PLF-N中PLF-N基因连接方向正确,开放读框完整并且与3-端V5抗原决定簇和6×His基因正确融合.将此重组表达载体线性化后通过电转化的方法转化PMAD11酵母感受态细胞,筛选Ade<+>(Mut)重组子并诱导表达.表达产物的SDS-PAGE和Western Blot检测结果表明,表达产物中有分子量与重组猪乳铁蛋白N-叶(rPLF-N)一致的特异性条带出现.这些实验结果有力地证明rPLF-N在酵母中得到了成功表达,而且表达产物可以被分泌到培养基中.重组表达产物的分子量大约为42kDa,说明表达产物未被糖基化,而且信号肽未能被加工去除.对表达产物表达时相分析结果表明,在诱导72小时后rPLF-N达到表达峰值,继续诱导对其表达量无显著影响.收集含表达产物的酵母培养基上清检测重组表达产物对大肠杆菌ATCC25922标准菌株的作用效果.实验结果表明,rPLF-N对实验菌株有一定抑制作用.