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目的:对河北省肾综合征出血热(HFRS)疫区人感染和鼠携带汉坦病毒(HV)进行基因序列测定,通过DNASTAR软件对两者进行比较分析,阐明同一地区鼠携带HV与人感染HV二者的病原学特征及联系,为HFRS的防控提供科学依据。方法:1通过流行病学调查,收集病人或疑似病人急性期血清标本;并在相同区域开展夹夜法捕鼠,无菌取鼠肺;2采用间接免疫荧光法(IFA)筛选阳性血清标本,从中提取HV RNA;用冷冻切片机切鼠肺,冷丙酮固定后,IFA筛选HV阳性鼠肺;3通过反转录套式聚合酶链反应(RT-nested PCR)扩增病毒核酸,进行基因分型;从阳性鼠肺中提取HV RNA,逆转录合成cDNA,根据已知HV标准毒株的基因序列设计SEO型和HTN型型特异性引物,用RT-nested PCR扩增,进行基因分型;4选择代表性疫区血清标本以及相同地区鼠肺标本PCR扩增产物经纯化回收后进行序列测定;5利用DNASTAR软件对人感染的HV及鼠携带的HV进行同源比较并构建系统发生树,并对同一地区人感染的HV及鼠携带的HV进行比较。结果:1本实验共收集病人或疑似病人血清标本158份,经IFA检测阳性101份,阳性率为63.92%。对阳性血清标本进行RT-PCR扩增,得到17份阳性结果,阳性率为16.83%。2对河北省HV阳性病人血清标本同时用SEO型和HTN型分型引物进行RT-nested PCR扩增,显示阳性标本所携带HV均为SEO型,未发现HTN型。3本实验从1630份鼠肺中共获得阳性鼠肺43份,带毒率为2.64%。从全省各地鼠密度和带毒率分布情况看,我省HFRS疫源地带毒鼠主要以宅区褐家鼠为主,其次为宅区小家鼠,野外带毒鼠不是主要传染源。4对阳性鼠肺标本总RNA同时用G1片段SEO型和HTN型分型引物分别进行扩增,显示阳性标本所携带HV均为SEO型,未发现HTN型。5人感染HV与鼠携带HV的G1、G2片段基因变异分析5.1人感染HV与鼠携带HV的G1片段核苷酸同源性比较及基因变异情况全省各地整体的人感染HV与鼠携带HV的G1片段核苷酸同源性比较结果显示G1片段核苷酸序列同源性高达95.0%~99.7%。其中SJZ和ffTS为95.0%,CD2、BD1、BD2、BD3和ffSJZ,QHD2、TS和ffQHD,CZ1、CZ2和ffCZ都是99.7%,其余的为95.2%~99.4%之间。同一地区两种标本的分别为:保定为95.5%~96.4%,承德95.5%~96.6%,沧州为99.7%,秦皇岛为95.8%~99.7%,石家庄为95.2%,唐山为99.4%。其中核苷酸同源性最高的为沧州的CZ1和ffCZ,秦皇岛的QHD2和ffQHD都是99.7%,核苷酸同源性最低为保定的BD1和ffBD1以及承德的CD1和ffCD1,各为95.5%。提示无论是同一地区的鼠和人之间,还是不同地区的鼠和人之间,HV都是具有较高的同源性。5.2人感染HV与鼠携带HV的G2片段核苷酸同源性比较及基因变异情况从9份人血清和7份鼠肺中提取得标本两者之间G2片段核苷酸同源性高达92.7%~99.7%。其中CZ2和ffBD1之间的同源性为92.7%,CD2和ffCZ,BD3、BD1和ffSJZ,QHD和ffTS都分别为99.7%,其余的都在93.7%~99.3%之间。同一地区两种标本的分别为:保定为95.7%~98.7%,承德为98.7%~99.3%,沧州为97.3%~98.3%,石家庄为94.7%,唐山为99.3%。其中核苷酸同源性最高的为承德的CD2和ffCD1以及唐山的TS和ffTS都是99.3%,核苷酸同源性最低石家庄的SJZ和ffSJZ为94.7%。6根据G1(217-573nt)和G2(2002-2301nt)片段用DNASTAR软件包构建系统进化树。G1片段构建的系统进化树显示QHD、ffQHD、TS、ffTS株亲缘关系接近。ffBD1,SJZ株亲缘关系接近, CZ1,ffCZ株亲缘关系较近。G2片段构建的系统进化树显示ffSJZ,BD1,BD3株亲缘关系接近, QHD2、TS、ffTS株亲缘关系接近,SJZ,ffBD1株亲缘关系接近,这与G1片断的比较一致,说明两地的同源性比较接近。其他序列同源性相对远些。7基因分型及系统进化树分析表明,河北省是典型的SEO型疫区。其基因亚型根据G1、G2片段分为S1、S3二个亚型,分型结果一致,均以S3亚型为主,未发现新亚型。除承德一小家鼠所携带HV根据G1片段构建进化树分型为S4亚型, G1和G2片段的分型结果基本一致。结论:1无论是同一区域,还是不同地区,河北省人感染HV与鼠携带HV高度同源,褐家鼠携带的HV是HFRS病人感染的最主要来源。2河北省人感染HV以SEO型为主,共包括S1、S3两个亚型,以S3亚型为主。疫源地宿主动物所携带的HV基因型以SEO型为主,基因亚型以S3亚型为主,且在河北省广泛分布。3在地理位置相近的地区,病毒基因组核苷酸序列同源性相对较高,系统进化关系较近,HV的分布具有一定的地理区域性。