【摘 要】
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本论文利用生物条形码放大技术,在原有技术基础上加以改进,通过构建基于生物条形码放大技术的DNA非标记电化学检测方法,实现对大肠杆菌DNA、沙门氏菌DNA和志贺氏菌DNA这三种
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本论文利用生物条形码放大技术,在原有技术基础上加以改进,通过构建基于生物条形码放大技术的DNA非标记电化学检测方法,实现对大肠杆菌DNA、沙门氏菌DNA和志贺氏菌DNA这三种食源性致病菌同时准确有效检测。主要内容如下:(1)研究了富含G碱基的DNA与普通DNA电化学行为的差异,以亚甲基蓝(MB)为电化学指示剂,对普通单链、双链DNA(ss-DNA、ds-DNA)、富含G碱基的单、双链DNA(Gss-DNA、 Gds-DNA)四种类型DNA的电化学行为进行了比较研究;为了提高电极响应信号及检测灵敏度,采取电沉积技术制备了纳米金阵列电极;通过简单有效的方法实现对目标DNA的检测,同时实现对碱基类型有显著差异的不同类型DNA的识别。(2)依据文献及有关数据库,确定大肠杆菌特征基因序列及目标DNA分子,并设计了目标DNA探针,同时通过专业软件进行模拟计算,验证所设计的DNA探针是否符合实验要求;利用DNA生物条形码和纳米金联级信号放大作用检测了大肠杆菌DNA,同时对传统检测方法进行改进,构建了基于DNA生物条形码的两步法检测目标DNA的新方法。(3)在前期工作基础上,通过查阅文献和专业数据库确定沙门氏菌、志贺氏菌两种食源性致病菌的特征基因序列及目标DNA分子,设计目标DNA探针,并进行模拟计算,验证所设计的DNA探针是否符合实验要求。建立了一种基于DNA生物条形码放大技术的非标记直接电化学检测方法,实现了对大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等多种食源性致病菌特征DNA分子的同时检测。
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