基于常压室温等离子诱变技术的生防型和促生型微生物菌剂的构建

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随着现代农业的大幅发展,其生态安全问题受到日益重视。我国迫切需要促进可持续农业的发展,在寻求高生产率和资源利用效率的同时,化学肥料给土壤结构带来的危害不可小觑。积极开发微生物复合菌剂,采用微生物复合菌剂代替传统化学肥料是达到环境友好型农业的理想策略之一。本研究的内容和结果如下:1、拮抗菌株TXM-A2的ARTP诱变及发酵优化。本研究利用ARTP诱变解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)TXM-A2,通过测量在接种诱变株后的尖孢镰刀菌生长半径的方法进行筛选,通过连续5代培养,观察突变株的遗传稳定性。以诱变株的OD600及无菌滤液对尖孢镰刀菌的抑制作用为检测指标,采用单因素试验优化发酵培养基,并最终通过诱变株的发酵过程优化工艺优化。结果表明:筛选出了一株诱变株AR7,对尖孢镰刀菌的抑制效果提升了13.70%。连续培养5代后,该突变株的遗传稳定性良好。优化后的种子培养基配方为葡萄糖0.5%,Na Cl0.5%,酵母浸粉2%,p H 7.0±0.2,AR7在此条件下OD600由3.250增加至4.553,抑菌直径由2.833 cm增加至2.875 cm。通过5 L发酵罐发酵AR7菌株,其最大活菌数可达到1.2×109 CFU·m L-1。2、副干酪乳杆菌对蔬菜种子的萌发及代谢产物分析。为探讨副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)发酵液对种子萌发的影响,以白菜等蔬菜种子为材料,研究了蔬菜种子在使用不同稀释倍数的副干酪乳杆菌发酵液后发芽率和发芽势的变化,并结合副干酪乳杆菌发酵液代谢产物中氨基酸的测定作出相应分析。结果表明:将副干酪乳杆菌发酵液稀释1000倍,其活菌数约为2.3×105 CFU·m L-1,可显著提高樱桃萝卜种子的发芽率和发芽势。代谢产物测定分析表明,副干酪乳杆菌可产生多种氨基酸;其代谢产物中赤霉素含量为0.04%,浓度约为416 mg·L-1;吲哚乙酸含量为0.002%,浓度约为3 mg·L-1。3、副干酪乳杆菌复合菌剂田间表现及促生效果分析。在本研究中,构建了副干酪乳杆菌(L.paracasei)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的复合微生物菌剂,分析蔬菜生长和土壤微生物多样性的变化。结果表明:使用副干酪乳杆菌复合菌剂浇灌后的鸡毛菜和樱桃萝卜平均株高分别提高了8.53 cm和10.2 cm,不同菌剂处理下土壤细菌群落结构和组成差异明显,以酿酒酵母和副干酪乳杆菌混合培养浇灌作物不仅提高了土壤细菌微生态多样性,代谢产物中较高的氨基酸、吲哚乙酸及赤霉素亦能吸引有益菌,为研究作物的促生抗逆技术和理论奠定了基础。
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