核心蛋白聚糖在小鼠肝纤维化形成及纤维化肝部分切除后余肝再生中作用的研究

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第一部分核心蛋白聚糖在小鼠肝纤维化形成中作用的实验研究目的:建立四氯化碳(CC14)小鼠肝纤维化模型,注射CC14后予小鼠尾静脉注射小鼠外源性核心蛋白聚糖decorin (DCN),观察DCN对纤维化形成是否有缓解作用,同时分析肝组织中TGF-β1, SMA、TNF-α、HGF以及Caspase3等基因以及蛋白表达情况,探讨DCN干预小鼠肝纤维化形成的机理。方法:(1)20只5周龄Balb/c小鼠,腹腔注射CCl45周建立肝纤维化模型,注射剂量为1ml/kg(CC14体积:橄榄油体积=1:1),每2天注射1次。检测肝标本中肝纤维化相关分子表达情况。(2)腹腔注射CC14三周后,将存活小鼠随机分为2组,实验组(DCN组)以及纤维化对照组。每天两次予实验组注入250ug/kg核心蛋白聚糖DCN,对照组注射等量的PBS和NS混合液(体积比为1:!)。DCN注射2周后,取下两组肝脏标本。取下方叶并将其分成两部分:一部分切成多个小块用于提取组织RNA,检测相关基因表达情况;另外一部分放入福尔马林中用于HE染色、Masson染色以及免疫组化检测相关指标。结果:外源性小鼠DCN蛋白可缓解四氯化碳诱导的肝纤维化。实验组较对照组肝纤维化程度明显减轻,胶原纤维量明显低于对照组。结论:本部分实验以小鼠肝纤维化模型为实验对象,自3周开始向实验组注射DCN蛋白,结果表明外源性DCN可以抑制纤维化相关分子的表达,缓解肝纤维化形成。第二部分核心蛋白聚糖在纤维化肝部分切除后余肝再生中作用的研究目的:建立纤维化70%肝切除再生模型。尾静脉注射外源性小鼠DCN蛋白,观察DCN对纤维化肝部分切除后余肝再生是否有促进作用。方法:46只5周龄Balb/c小鼠,其中6只注射橄榄油,剩余40只注射CC14建立5周肝纤维化模型。予存活肝纤维化小鼠实施70%肝切除术,术后将小鼠随机分为3组:实验组(DCN组)、橄榄油对照组以及纤维化组。术后向实验组注射外源性小鼠DCN蛋白。用肝脏体重比率、RT-PCR以及免疫组化等方法检测肝再生相关指标,以明确外源性DCN蛋白对肝纤维化小鼠部分肝切除后余肝再生是否有促进作用。结果:DCN组TGF-β1和α-SMA等分子表达下调,而肝脏体重比率较对照组升高(P<0.05),差异有统计学意义。结论:外源性小鼠DCN蛋白可促进小鼠纤维化肝部分肝切除后余肝再生。
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