论文部分内容阅读
BDNF是神经生长因子家族重要成员,研究发现BDNF及其受体在骨痂中大量表达,神经生长因子可能在骨折愈合过程中发挥重要作用,但其具体机制尚不明确。骨折延迟愈合、骨折不愈合是创伤骨科临床常见难题,成骨细胞是骨折愈合过程中重要的修复细胞,研究BDNF对成骨细胞调控作用具有重要意义。研究目的：探求BDNF对成骨细胞增殖及凋亡的影响。研究方法：本研究首先在体外培养成骨细胞,并利用RT-PCR检测ALP mRNA表达对成骨细胞进行鉴定；使用MTT法检测BDNF对成骨细胞增殖的影响；BDNF作用于成骨细胞,利用annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。研究结果：(1)细胞培养及鉴定：从小鼠颅骨分离培养的成骨细胞生长旺盛,接种24小时大部分细胞已经贴壁,原代细胞7天长满瓶底,传代后5天就能长满瓶底,第三代成骨细胞仍有较高活性,RT-PCR检测到成骨细胞中ALP mRNA高表达,证实培养细胞为成骨细胞。(2)MTT法发现25ng/ml BDNF处理成骨细胞未显示明显促增殖作用,50、100ng/ml BDNF明显促进成骨细胞增殖。(3)Annexin V-FITC/PI双染结果显示50、100ng/ml BDNF显著抑制细胞凋亡,免疫印迹显不BDNF促进抑凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax表达水平。研究结论：采用乳小鼠颅骨分离培养的成骨细胞具有良好活性,50ng/ml以上浓度BDNF处理成骨细胞能显著促进细胞增殖,抑制成骨细胞凋亡。