四乙基氯化铵(TEA)作为大电导激活的钾离子通道的阻断剂,它能够诱发小鼠气管环震颤,但是TEA诱导的小鼠平滑肌细胞震颤产生的分子机制以及调控平滑肌功能的作用上存在很大的争议。本论文以离体小鼠主气管环和单个气道平滑肌细胞为标本,借助生物机能实验系统(BL-420S)以及激光共聚焦显微器(LSM700),研究了钾离子通道阻断剂(TEA)、L-型电压依赖钙通道阻断剂(硝苯地平)、氯离子通道阻断剂(NA,尼弗酸)、胆碱能受体激动剂(ACh,乙酰胆碱)、三磷酸肌醇受体阻断剂(2-APB,2-氨基乙酯二苯基硼酸)、肌质网钙泵抑制剂(TG,毒胡萝卜素)、电压依赖性钠离子通道阻断剂(TTX,河豚毒素)、兰尼碱受体阻断剂(兰尼碱)、钠钙交换泵抑制剂(KB-R7943)在平滑肌周期性震颤中发挥的作用。结果显示TEA引发了气道震颤,震颤能够被硝苯地平、河豚毒素、尼弗酸、KB-R7943抑制,将细胞外液中的钠离子用锂离子替代,使钠钙交换体失活,震颤先增强后消失。这些结果表明L-型钙离子通道、电压依赖性钠离子通道、钙激活氯离子通道通道、钠钙交换体参与了震颤的发生。在单个小鼠气道平滑肌细胞的研究发现,TEA引发细胞内钙离子振荡,接着文章对细胞内钙库进行了研究,发现在毒胡萝卜素、2-氨基乙酯二苯基硼酸存在的情况下,TEA未能引发震颤,但是兰尼碱存在的情况下,TEA能够引发震颤,将细胞外钙离子移除,也能够抑制震颤,这表明三磷酸肌醇受体介导的钙离子的释放和钙库排空激活的通道介导的细胞外钙离子内流参与了离体小鼠气管环的震颤。所有数据表明,TEA引起的震颤是L-型钙通道、电压依赖性钠离子通道、钙离子激活的氯离子通道、钠钙交换体、三磷酸肌醇受体介导的钙离子释放和细胞外钙离子内流协同调控的结果。此外,文章第二部分进行了哮喘相关基因敲除小鼠模型的建立工作。以TMEM16A基因为编辑对象,根据CRISPR/Cas9系统设计原理,设计终筛选得到两条sgRNA。通过显微注射法,将sgRNA和Cas9mRNA注射到受精卵胞浆,最终得到五只F0代小鼠鼠尾基因组鉴定结果显示两只小鼠完成基因编辑。