论文部分内容阅读
MoHrip2是本实验室从稻瘟菌发酵液中分离得到的一种蛋白激发子,该蛋白由152个氨基酸组成,编码基因读码框含有459个碱基(GenBank序列号为:JQ815555.1)。已有的研究结果表明,MoHrip2可增强水稻对稻瘟病和白叶枯病的抗性。本文通过转录组测序技术和互作研究技术揭示水稻对MoHrip2的免疫应答途径。主要研究成果如下:1.MoHrip2的真核表达与纯化成功构建了MoHrip2的真核表达载体PICZαA-MoHrip2,SDS-PAGE和Western-blot表明该蛋白在毕赤酵母细胞中得到正确表达;在烟草细胞上活性检测良好。2.转录组测序及分析浓度为30uM的MoHrip2溶液处理3-4叶期水稻,取0h、24h、48h样品进行转录组测序。筛选获得24h和48h的差异表达基因。GO和KEGG分析表明差异表达基因主要参与生物代谢、次级产物代谢过程,Pathway富集到异黄酮途径。3.转录组数据定量验证定量验证发现水稻中异黄酮生物合成相关基因IFR、IFS在48h得到明显上调表达,与此同时,水杨酸合成相关基因PAL,水杨酸转导相关基因PR-1a、PR-10,PR5也明显上调;此外,MoHrip2处理的水稻中水杨酸含量与对照组相比,明显提高,说明MoHrip2可以诱导水稻中水杨酸基因的表达和水杨酸的合成。推测MoHrip2可能是先通过诱导水稻中水杨酸控制相关基因的表达,水稻体内合成水杨酸激素后,诱导产生抗病转录因子和特异性基因的表达,同时水杨酸合成途径中的关键酶PAL参与到异黄酮的生物合成途径中。4.MoHrip2与水稻蛋白OsOlp的体内互作验证生物信息分析发现,OsOlp与Mo2BP1序列同源性较高,而且OsOlp存在一个跨膜结构域,推测OsOlp可能是MoHrip2的互作蛋白。酵母双杂交实验结果表明,三缺培养基平板上,只有共转了AD-OsOlp和BD-MoHrip2的平板上才有酵母生长,说明MoHrip2与OsOlp可能存在相互作用。研究结果为进一步研究水稻对MoHrip2的免疫应答机制奠定了基础。